세포 식균 작용 — 인큐사이트^® 식균 작용 분석

세포 식세포 작용 및 사멸세포 제거

대식세포와 같은 식세포 면역 세포의 핵심 기능은 질병이 있거나 죽어가는 세포를 식세포 작용으로 제거하는 것입니다. 사멸 또는 세포자멸 세포를 식세포 작용으로 제거하는 것을 사멸세포 제거라고 하며, 염증 에피소드 해결(예: 염증 후 지속되는 호중구 제거)과 만성 염증성 또는 자가면역 질환(예: COPD, 천식, 류마티스 관절염, 섬유증, 동맥경화증) 발생 방지에 중요합니다. 사멸세포 제거는 또한 항암제 치료 후 사멸 종양 세포를 효율적으로 제거하여 세포 내용물을 포함하고 원치 않는 염증 반응을 방지하는 데 핵심적입니다.

암세포는 식세포에 의해 제거되기 위해 반드시 죽을 필요는 없습니다. 종양 세포는 식세포를 유도하는 인자로 세포에 표지하여 식세포에 의한 섭취와 제거를 촉진하는 인자로 표적화될 수 있습니다. 항체 의존성 세포 식세포작용(ADCP)은 B 세포를 표적으로 하는 항-CD20 단클론 항체인 리투시맙과 같은 항체를 추가함으로써 유발됩니다. 유사한 전략으로는 종양 세포가 제거를 회피하는 '먹지 마세요' 신호(예: CD47)의 발현을 차단하는 항체를 사용하는 것입니다. 항-CD47 항체는 이 신호를 차단하여 세포가 식세포에 의해 인식되고 제거될 수 있도록 합니다.

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응용

Incucyte^® 생세포 분석 시스템은 세포 배양기 내에서 실시간으로 자동화된 세포 식균 작용 및 사멸세포 제거 분석을 가능하게 합니다.

전체 분석 시간 동안 세포 식균 작용을 자동으로 정량화할 수 있습니다. 검증된 pH 감지 프로브로 표지된 표적 세포를 사용하여 세포 내부화를 실시간으로 측정하세요 (Incucyte^® pHrodo^® 레드 세포 표지). Incucyte^® 고해상도 위상차 대비 이미지를 사용하여 세포 포식 신호를 확인하세요.

다음에 이상적입니다:

세포 식작용(에포로사이토시스) 억제/활성화를 위한 화합물 스크리닝
항체 매개 세포 식작용 정량화 (예: 항-CD47 항체 매개 식작용 또는 ADCP)

Incucyte^® 시스템을 사용하여 획득한 타임랩스 영상으로, 마우스 대식세포 J774A.1에 의해 섭취되는 pHrodo^® 레드 라벨 세포자멸 Jurkat T 림프구의 실시간 시각화를 보여줍니다. 세포자멸 Jurkat 세포는 식작용되며, 파고좀의 산성 환경에 들어가면 형광이 증가합니다. Incucyte^® 통합 이미지 분석 도구는 전체 분석 시간 동안 적색 형광 신호의 검출 및 측정을 가능하게 합니다.

분석 개념

대식세포(예: J774A.1 마우스 대식세포) 또는 기타 식세포 세포를 96- 또는 384-웰 미세 적재판에 파종합니다.

Incucyte^® pHrodo^® 레드 세포 표지 키트를 사용하여 표지된 표적 사멸 세포(예: 호중구, 주르캇)를 추가하고 표적 세포의 식세포 흡수를 실시간으로 측정합니다.

세포 형광의 증가는 표적 세포가 식세포체로 내재화됨을 나타냅니다. Incucyte^® 자동 이미지 분석은 시간에 따른 세포 식세포 작용의 정량화를 가능하게 합니다.

주요 장점

시간 경과 이미징을 사용하여 세포의 식세포 작용 시각화 및 정량화
전체 분석 시간 과정에 대한 자동화된 분석
96/384 웰 프로토콜을 간단하게 혼합하고 읽을 수 있으며, 세척, 고정, 리프팅 불필요
높은 유연성을 가진 분석 형식에서 관련 측정 수행
Incucyte^® pHrodo^® 레드 셀 라벨링 키트는 선택한 식세포/표적 세포와 호환 가능

실시간 이미징을 통한 식세포 작용의 시각화 및 정량화

직관적인 Incucyte^® 이미지 분석 도구를 사용하여 실시간으로 식세포 작용 관찰 및 측정. 이미지와 동영상으로 치료 효과 검증
pHrodo 형광 신호는 표적 세포가 내재화될 때만 존재하여 인공 신호 위험 제거

Incucyte^® pHrodo^® 적색 세포 표지 키트를 사용하여 24시간 동안 J774A.1 마우스 대식세포가 사멸 Jurkat 세포를 식세포하는 시간 경과 이미지. 형광 신호를 식세포 작용과 관련된 표현형 변화와 상관관계 분석. Incucyte^® 이미지 분석 도구를 사용하여 사멸 세포 제거 정량화. 사용자 친화적 소프트웨어로 식세포된 사멸 세포(파란색 마스크) 직접 이미지 기반 검출 가능

전체 분석 시간 과정에 대한 자동화된 분석

세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 치료 효과가 언제 어떻게 발생했는지 확인하기

96/384 웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징하고 분석하여 시간에 따른 사멸 세포 제거의 마이크로플레이트 판독값 제공(왼쪽). 시간 경과 그래프는 농도 의존적 치료 효과를 보여줌(중앙). 약리학을 비교하기 위해 데이터를 농도-반응 곡선으로 변환(오른쪽).

간단한 96/384 웰 프로토콜, 세척 없음, 고정 없음, 리프팅 없음

Incucyte® 식세포 작용 분석 프로토콜 보기

1) 96웰 플레이트에 식세포 세포(예: J774A.1, 1-10K/웰) 파종. 밤새 배양 (50 µL/웰). 2) 식세포 전 화합물로 효과 세포 처리 (0.5-24시간 사전 처리, 25 µL/웰). 3) 처리된 웰에 Incucyte pHrodo 표지된 표적 세포 추가 (10 µL/웰, 25 µL/웰). 4) Incucyte 시스템에서 2-18시간 동안 10-20분마다 이미지 캡처 (20x 또는 10x). 통합 소프트웨어로 분석.

높은 유연성을 가진 분석 형식에서 관련 측정 수행

질병, 죽은 또는 죽어가는 세포의 식세포 작용을 측정하기 위해 원하는 식세포 및 표적 세포 선택. 항체 매개 세포 식세포 작용(예: 항-CD47 항체 매개 식세포 작용/ADCP) 또는 에페로사이토시스(사멸성 세포의 식세포 작용) 조사.

생존 가능한 T 림프모구 세포 CCRF-CEM은 Incucyte^® pHrodo^® 레드 세포 표지 키트로 표지되었으며, 항-CD47 단클론 항체 또는 IgG 동형 대조군에 노출되었습니다. 항-CD47 항체는 CCRF-CEM 세포의 '먹지 마세요' 신호에 결합하여 대식세포 매개 식세포 작용을 촉진합니다. 항-CD47 존재 시 표적 세포는 골수 유래 대식세포에 의해 포식되어 형광 신호가 증가하고 농도 의존적 효과를 생성합니다. IgG 동형 대조군의 존재는 테스트된 모든 농도에서 포식에 전혀 영향을 미치지 않았습니다.

자주 묻는 질문

세포 식세포 작용 자주 묻는 질문

여러 다른 대식세포 세포주를 특성화하여 가장 높은 기본 식균 속도를 가진 세포주를 찾아야 합니다. 어떻게 대식세포 식균을 비교하기 시작해야 할까요?

다른 대식세포 세포주의 식균 능력을 비교하려면 안정적이고 재현 가능한 배양 조건과 빈번한 식균 활성 모니터링이 필요합니다. 좋은 시작점은 pH에 민감한 염료로 처리된 미끼 또는 표적 세포를 사용하여 두 세포주를 직접 비교하는 식균 분석을 수행하고, 정기적인 간격으로 형광을 포함하는 식포체의 수를 비교하는 것입니다. 빈번한 모니터링과 이미징이 필요한 분석은 라이브 세포 분석 플랫폼을 사용하여 배양 시스템을 방해하지 않고 정기적인 이미징을 가능하게 합니다.

대식세포 식균 분석에 대해 자세히 알아보기*** [LINK TO PHAGO BIOPARTICLES PAGE]

에페로사이토시스란 무엇이며, 식균 작용과 어떻게 다른가요? 식균 분석으로 호중구 에페로사이토시스를 연구할 수 있나요?

에페로사이토시스는 생존 세포, 세포 조각 또는 기타 잔해와 대조적으로 죽은 세포 또는 세포자멸 세포의 식균 작용을 설명하는 용어입니다. 따라서 식균 작용 분석은 호중구 및 기타 모든 식균 세포 유형에서 에페로사이토시스를 감지할 수 있습니다.

우리 연구실은 대식세포 활성화 유도를 위한 1차 선별 방법으로 식균 작용 분석을 사용하지만, 이 방법은 최종 사용자에 따라 크게 달라집니다. 어떻게 우리의 식균 작용 분석을 표준화하고 데이터 신뢰성을 개선할 수 있을까요?

생물체를 기반으로 하는 모든 분석과 마찬가지로 모든 영향 요인을 통제하는 것은 불가능하지만, 배양기 내 생세포 분석으로 식균 작용 분석을 표준화하면 주요 변동성 원인 - 이미징을 위해 플레이트가 배양기 밖에 있는 시간을 줄일 수 있습니다. 생세포 분석은 수동 작업 없이 대식세포 식균 작용을 정기적이고 포괄적으로 분석할 수 있게 합니다.

식균 작용 분석에서 대상 세포가 식균 세포에 의해 포식되기 위한 크기 제한이 있나요? 특정 크기 임계값 미만이어야 하나요?

일반적으로 식세포 작용의 속도와 효율성은 섭취된 물질의 크기와 모양에 따라 달라지며, 동기 부여된 식세포는 경로상의 모든 것을 섭취하려고 시도합니다. 대상 세포가 비정상적으로 크거나 특이한 모양이 아니라면, 식세포 분석에서 대상 세포의 크기나 모양에 대한 실질적인 제한은 없습니다.

리소좀 기능 부전이 있는 대식세포로 식세포 작용을 평가할 수 있습니까?

시각적 관찰만으로 구축된 식세포 분석은 리소좀 기능 부전이 있는 대식세포의 식세포 작용을 연구하는 데 적절할 수 있습니다. 그러나 대부분의 다른 식세포 분석은 내포체 구획과 융합될 때 발생하는 pH 변화에 의존하여 색상 변화를 유도하므로, 리소좀 기능 부전이 있는 대식세포는 의미 있는 데이터를 제공하지 못할 수 있습니다. 이러한 경우 대식세포 식세포 작용에 대한 pH 감지 표시자의 가치는 실험적으로 결정되어야 합니다.