세포 식균 작용 — 인쿠사이트® 식균 작용 분석
대식세포와 같은 식세포성 면역세포의 핵심 기능은 질병이 있거나 죽어가는 세포를 식작용하는 것입니다. 사멸 또는 세포자멸된 세포를 식작용을 통해 제거하는 것을 사멸세포 제거(에페로사이토시스)라고 하며, 염증 에피소드를 해결하고(예: 염증 후 지속되는 호중구 제거) 만성 염증성 또는 자가면역 질환(예: COPD, 천식, 류마티스 관절염, 섬유증, 동맥경화증)의 발생을 방지하는 데 중요합니다. 사멸세포 제거는 또한 항암제 치료 후 세포자멸된 종양 세포를 효율적으로 제거하여 세포 내용물을 포함하고 원치 않는 염증 반응을 방지하는 데 핵심적입니다.
암세포는 식세포 세포에 의해 제거되기 위해 반드시 죽을 필요는 없습니다. 종양 세포는 식세포 세포를 유도하는 인자로 세포에 표지하여 식작용을 통한 제거를 촉진할 수 있습니다. 항체 의존성 세포 식작용(ADCP)은 리투시맙(B세포를 표적으로 하는 항-CD20 단클론 항체)과 같은 항체를 추가하여 유발됩니다. 유사한 전략으로는 '먹지 마세요' 신호(예: CD47)의 발현을 차단하는 항체 사용이 있으며, 이는 종양 세포가 제거를 회피하는 메커니즘입니다. 항-CD47 항체는 이 신호를 차단하여 세포가 식세포에 의해 인식되고 제거될 수 있도록 합니다.
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바이러스 감염성을 평가하는 염색 없는 방법으로, 정확성을 높이고 수동 단계를 줄이며 배양 시간을 단축합니다.
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싸토리우스의 라이브 세포 분석과 유세포 분석을 단일 워크플로우로 결합하여 면역 세포 제거 메커니즘에 대한 추가 인사이트를 얻으세요.
Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템은 세포 배양기 내에서 실시간, 자동화된 세포 탐식 및 부패세포 제거 분석을 가능하게 합니다.
전체 분석 시간 동안 세포의 식균 작용을 자동으로 정량화하세요. 검증된 pH 감지 프로브(Incucyte® pHrodo® 레드 세포 표지를 위한 식균 작용)로 표지된 표적 세포를 사용하여 세포 내재화를 실시간으로 측정하세요. Incucyte® 고해상도 위상차 대비 이미지를 사용하여 세포 포식을 직접 시각화하여 식균 작용 신호를 확인하세요.
다음에 이상적입니다:
싸토리우스 시스템을 사용하여 획득한 타임랩스 영상으로, 마우스 대식세포 세포주 J774A.1에 의해 섭취되는 사멸성 Jurkat T 림프구의 실시간 시각화를 보여줍니다. 사멸성 Jurkat 세포가 식세포 작용을 통해 섭취되며, 파골소체의 산성 환경에 들어가면서 형광이 증가합니다. 싸토리우스의 통합 이미지 분석 도구는 전체 분석 시간 동안 적색 형광 신호의 감지와 측정을 가능하게 합니다.
대식세포(예: J774A.1 마우스 대식세포) 또는 기타 식세포는 96- 또는 384-웰 마이크로 티터 플레이트에 파종됩니다.
Incucyte® pHrodo® 적색 세포 표지 키트를 사용하여 표지된 표적 세포(예: 호중구, 주르캇)가 추가되고, 표적 세포의 식세포 섭취가 실시간으로 측정됩니다.
세포 형광의 증가는 표적 세포가 식세포체로 내재화됨을 나타냅니다. Incucyte® 자동 이미지 분석은 시간에 따른 세포 식세포 작용의 정량화를 가능하게 합니다.
J774A.1 마우스 대식세포가 Incucyte® pHrodo® 레드 세포 라벨링 키트를 사용하여 사멸된 Jurkat 세포를 탐식하는 시간경과 이미지(24시간 동안). 형광 신호를 탐식과 관련된 표현형 변화와 상관관계 분석. Incucyte® 이미지 분석 도구를 사용하여 세포 탐식(에페로사이토시스)을 정량화. 사용자 친화적 소프트웨어로 탐식된 사멸 세포를 직접 이미지 기반으로 감지할 수 있습니다(파란색 마스크).
세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 치료 효과가 발생한 방식과 시기를 결정합니다.
96/384 웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징하고 분석하여 시간에 따른 세포 탐식 과정의 마이크로플레이트 판독값을 제공합니다(왼쪽). 시간 경과 그래프는 농도 의존적 치료 효과를 보여줍니다(중앙). 약리학적 비교를 위해 데이터를 농도-반응 곡선으로 변환합니다(오른쪽).
Incucyte® 식세포 작용 분석 프로토콜 보기
1) 식세포 세포 파종 (예: J774A.1, 1-10K/웰) 96웰 플레이트에. 하룻밤 배양 (50 µL/웰). 2) 식세포 작용 전 효과 세포를 화합물로 처리 (0.5-24시간 사전 처리, 25 µL/웰). 3) 처리된 웰에 Incucyte pHrodo 표지된 표적 세포 추가 (10 µL/웰, 25 µL/웰). 4) Incucyte 시스템에서 2-18시간 동안 10-20분마다 이미지 캡처 (20x 또는 10x). 통합 소프트웨어로 분석.
생존 T 림프모구 세포 CCRF-CEM은 Incucyte® pHrodo® 레드 세포 표지 키트로 표지되었으며, 항-CD47 단클론 항체 또는 IgG 아이소타입 대조군에 노출되었습니다. 항-CD47 항체는 CCRF-CEM 세포의 '먹지 마세요' 신호에 결합하여 대식세포 매개 탐식작용을 촉진합니다. 항-CD47 표적 세포가 골수 유래 대식세포에 의해 포식되어 형광 신호가 증가하고 농도 의존적 효과를 나타냈습니다. 아이소타입 대조군 IgG는 테스트된 모든 농도에서 포식에 아무런 영향을 미치지 않았습니다.
다른 대식세포 세포주의 식세포 능력을 비교하려면 안정적이고 재현 가능한 배양 조건과 식세포 활성의 빈번한 모니터링이 필요합니다. 좋은 시작점은 pH에 민감한 염료로 처리된 미끼 또는 표적 세포를 사용하여 머리-대-머리 식세포 분석을 수행하고 정기적인 간격으로 형광을 포함하는 식포의 수를 비교하는 것입니다. 빈번한 모니터링과 이미징이 필요한 분석은 라이브 세포 분석 플랫폼으로 수행하면 배양 시스템을 방해하지 않고 정기적인 이미징이 가능합니다.
싸토리우스의 식세포 작용 분석에 대해 자세히 알아보기*** [LINK TO PHAGO BIOPARTICLES PAGE]
에페로사이토시스는 살아있는 세포, 세포 조각 또는 기타 부산물이 아닌 죽은 세포나 사멸된 세포의 식세포 작용을 설명하는 용어입니다. 따라서 식세포 작용 분석은 호중구와 다른 모든 식세포 세포 유형에서 에페로사이토시스를 감지할 수 있습니다.
모든 생물체 기반 분석과 마찬가지로, 모든 영향 요인을 통제하는 것은 불가능하지만, 배양기 내 생세포 분석으로 식세포 분석을 표준화하면 주요 변동성 요인 — 이미징을 위해 플레이트가 배양기 밖에 있는 시간을 줄일 수 있습니다. 생세포 분석은 수동 작업 없이 대식세포 식세포의 정기적이고 포괄적인 분석을 가능하게 합니다.
일반적으로 식세포의 속도와 효율성은 포식되는 항목의 크기와 모양에 연관되어 있으며, 동기 부여된 식세포는 경로상의 모든 것을 포식하려 할 것입니다. 표적 세포가 비정상적으로 크거나 이상한 모양이 아니라면, 식세포 분석을 위한 표적 세포 선택 시 세포 크기나 세포 모양에 실질적인 제한은 없습니다.
라이소좀 기능 부전을 가진 대식세포의 식균 작용을 연구하는 데는 시각적 관찰에만 의존하는 식균 작용 분석이 적절할 수 있습니다. 그러나 대부분의 다른 식균 작용 분석은 엔도좀 구획과의 융합 시 발생하는 pH 변화에 의존하므로, 라이소좀 기능 부전을 가진 대식세포는 의미 있는 데이터를 제공하지 못할 수 있습니다. 이러한 경우 대식세포 식균 작용에서 pH 감지 지표의 가치는 실험적으로 결정되어야 합니다.
pHrodo® 레드 셀 라벨링 키트 for 싸토리우스®
비세포자멸사 세포 식균 작용 (항체 의존성 세포 식균 작용) 인큐사이트 분석
실시간 식세포 작용의 생세포 분석 응용
면역치료를 위한 정량적 생세포 이미징 분석: 주화성, 면역세포 사멸 및 식세포작용
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