응용 노트: 간소화되고 소형화된 고급 유세포 분석법을 이용한 보체 의존성 세포독성 연구

본 응용 노트의 배경 정보

단일클론항체(mAb) 치료제의 연구 개발은 표적 분자에 대한 높은 특이성과 친화성을 지닌 mAb의 잠재력 덕분에 신약 개발 분야에서 광범위하고 빠르게 성장하는 영역입니다. 승인된 mAb 기반 치료제는 다양한 질병 영역에 걸쳐 사용되고 있지만, 대부분은 암이나 면역 매개 질환 치료에 사용됩니다.

단클론항체(mAb)는 여러 작용 기전(MoA)을 통해 암세포와 같은 표적 세포에 대해 세포독성을 나타냅니다. 이러한 작용 기전은 종종 인체의 면역 체계를 활용하여 항종양 효과를 발휘합니다. 대표적인 예로는 Fc 수용체를 매개로 하는 세 가지 주요 기능인 항체 의존성 세포독성(ADCC), 항체 의존성 세포 식균작용(ADCP), 그리고 보체 의존성 세포독성(CDC)이 있습니다. ADCC와 ADCP는 항체가 면역 세포의 Fc 수용체와 표적 세포의 항원에 동시에 결합하는 원리에 기반합니다. 이를 통해 표적 세포는 세포독성 세포(예: 자연 살해 세포) 또는 식세포(예: 단핵구 또는 대식세포)와 가까워져 면역 제거가 촉진됩니다.

이와 대조적으로, CDC에서는 항원에 결합된 단클론항체(mAb)가 혈액 내에 존재하는 단백질들을 동원하여 세포 용해를 유도합니다. 이 과정은 C1q 단백질이 mAb의 Fc 영역에 결합하면서 시작되며, 이는 보체 경로의 활성화를 촉발합니다. 복잡한 분자 연쇄 반응이 이어지고, 최종적으로 막 공격 복합체(MAC)가 형성됩니다. MAC는 표적 세포막에 구멍을 만들어 세포 사멸을 초래합니다.

초기 단계의 단일클론항체(mAb) 개발에서는 임상 평가에 적합한 특성을 가진 mAb를 선택하기 위해 CDC를 포함한 여러 작용기전(MoA)에 대한 활성을 분석하는 데 종종 검사법이 사용됩니다. CDC 활성을 측정하는 기존 기술은 다음과 같은 특징을 가집니다.

• 대량의 귀중한 항체 및 혈청 샘플이 필요합니다.
• 데이터 수집 속도가 낮은 장비(예: 기존 유세포 분석기)를 사용하십시오.
• 이 방법은 프로토콜 최적화, 고정 및 여러 번의 세척과 같은 단계를 거쳐야 하므로 힘들고 시간이 많이 소요됩니다.