NK 세포 기능 및 표현형 평가

^® 면역 세포의 존재 하에 SKOV-3 Incucyte^® NucLight Red 스페로이드의 혼합 위상 및 형광 이미지로, 무처리 또는 항-CD3 (10 ng/ml)와 IL-2 (10 ng/ml) 또는 허셉틴 (0.08 – 50 ug/mL)의 존재 상태입니다. 세포독성은 적색 형광 강도를 기반으로 정량화되었습니다. 데이터는 활성화된 T 세포 집단에 의한 종양 스페로이드 파괴와 허셉틴 유도 세포 세포독성을 보여줍니다.

자연살해세포 매개 항체의존성 세포독성은 농도 의존적 표적 세포 사멸과 granzyme 생성을 유도합니다.

인코딩된 라지 종양 세포(20K/well)를 두 명의 서로 다른 공여자의 PBMCs(200K/well)와 공동 배양했습니다. PBMCs는 세 가지 항-CD20 항체 중 하나와 함께 배양되었습니다: Ab-1(IgG1), Ab-2(IgG1) 또는 음성 대조군 Ab-3(IgA2). 농도 범위는 10ug/mL – 0.128 ng/mL 사이였습니다.

4시간에, 10 µL 샘플을 인간 NK 세포 킬링 키트와 iQue^® 3를 사용하여 종양 세포 제거를 분석했으며, Granzyme A도 iQue^® 인간 NK 세포 동반 키트를 사용하여 측정했습니다. (A,B) 두 공여자의 표적 세포 제거는 항체에 대해 차등적 반응을 보였습니다. (C,D) Granzyme A 생산은 농도와 공여자에 따라 달랐습니다. (E,F) NK 세포의 CD16 검출은 항-CD20 항체 농도가 증가함에 따라 감소했습니다. 이는 CD16 탈락 또는 CD20 항체의 경쟁 때문일 수 있습니다.

인코딩된 K562 종양 세포(20K/well)를 16-18시간 동안 단독 배지(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 & 100 ng/mL IL-15가 포함된 배지(활성화 NK 세포)에서 배양된 농축(음성 선택) 인간 NK 세포와 효과__PH_0__ 비율 1:1 또는 5:1로 공동 배양했습니다. 4시간과 24시간에 10 µL 샘플을 iQue^® 인간 NK 세포 킬링 키트와 iQue^® 3를 사용하여 종양 세포 제거를 분석했습니다. (A) 4시간 동안 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 공동 배양 후 표적 세포 생존성을 나타내는 히스토그램. (B,C) 종양 세포를 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 공동 배양한 후 표적 세포 사멸 백분율 요약 (B) 4시간 또는 (C) 24시간.

인코딩된 K562 종양 세포(20K/well)를 16-18시간 동안 단독 배지(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15가 포함된 배지(활성화 NK 세포)에 배양된 농축(음성 선택) 인간 NK 세포와 함께 효과__PH_0__ 비율 5:1로 공동 배양했다. 24시간의 공동 배양 후, 10 µL 샘플을 제거하고 iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트 및 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 분석했다. (A) 활성화 마커 CD69 및 CD25의 발현. (B) IFNg 생성 및 Granzyme B 분비. (C) 추가 사이토카인을 iQue^® 인간 NK 세포 동반 키트와 iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트를 결합하여 병렬로 평가했다. NK = 자연살해세포. T = 표적 K562 종양 세포.

IL-2와 IL-15로 활성화하면 과립효소 B와 CCL5(RANTES)와 같은 다양한 효과 단백질의 활성 마커 발현과 분비가 증가했습니다. 이러한 효과는 NK 세포를 표적 세포와 함께 배양할 때 더욱 강화되었습니다.