종양 구상체 분석

그림 1. 조직 배양 배양기 내에서 방해받지 않고 성장하는 동안 구상체(spheroid)의 크기를 모니터링하세요.  

이미지는 Incucyte® Nuclight Orange 2.0 렌티바이러스를 발현하는 U-87 MG 유방암 구상체의 밝은 시야 및 공초점 형광을 보여줍니다 ± 세포독성 물질 캄프토테신(3µM). Incucyte® Cytotox Green 염료는 구상체 내 세포 사멸을 정량화하는 데 사용되었습니다. 비히클 처리된 구상체의 밝은 시야 영역은 크기가 증가하는 반면, CMP 처리된 구상체는 밀집된 상태를 유지합니다. 밝은 시야 영역 정량화를 위해 8시간마다 자동으로 이미지를 촬영했습니다.

그림 2. 고품질 HD 위상, 밝은 시야, 그리고 공초점 이미지로 형태를 밝혀내다.  

72시간 배양 후 획득한 구상체의 고품질 HD 위상, 밝은 시야, 그리고 공초점 형광 이미지는 Incucyte^® Nuclight Orange를 발현하는 A549, MCF-7, U87 MG 세포로 형성된 구상체의 형태 차이를 보여준다. 다양한 세포 유형에서 느슨한 응집체와 밀집된 구상체 형태를 쉽게 구별할 수 있다. 모든 이미지는 10배 확대로 캡처되었다.

단일 또는 공동 배양에서 세포 변화 관찰하기

그림 3. 단일 스페로이드 적용 시 세포 건강 효과 시각화  

Incucyte^® 아넥신 V 그린 염료를 사용하여 위상차 및 형광 판독 비교. 공초점 이미지는 A549 스페로이드의 마스킹된 위상차 영역 내 형광(아넥신 V 그린 및 Nuclight 오렌지)을 보여줍니다. 세포독성 화합물 처리 4일 후 위상차 영역의 시간 경과 프로파일은 3배 희석된 약물에 대한 세포독성 반응을 나타내며, 약물 농도가 증가함에 따라 스페로이드 성장이 억제됩니다. 위상차 경계 내에서 측정된 평균 녹색 강도(하단 행)는 화합물에 대한 차별적 반응을 보여줍니다.

그림 4. 싸토리우스 CX3 생세포 분석 시스템을 사용하여 구상체와 다중 형광 시약을 지속적으로 모니터링하세요.  

U87 MG 구상체는 싸토리우스 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하며, 플루오로우라실(5-FU)과 시스플라틴으로 처리되었습니다. 공초점 현미경을 사용하여 싸토리우스 아넥신 NIR 염료 존재 하에 96시간 동안 구상체를 이미징했습니다. 5-FU 처리는 주황색 평균 형광의 증가를 유발하여 G1기 세포 수의 증가를 나타냈습니다. 반면, 시스플라틴은 높은 농도에서 아넥신 NIR 반응에 의해 입증된 세포 사멸을 유도했습니다. 낮은 농도에서 시스플라틴은 초기 시점에 녹색 평균 형광의 일시적 증가를 야기하여 세포 주기 역학의 변화를 시사했습니다.

재현 가능하고 정량적인 데이터 생성

그림 5. 싸토리우스의 실험실 검증 및 입증된 단일 종양 구상체 프로토콜은 따라하기 쉽습니다. 

3D 세포 배양 기술 문제 해결에 소요되는 시간을 줄이고, 정량적 분석에 적합한 이미지를 얻기 위한 시행착오 접근법의 필요성을 제거하세요.

프로토콜 다운로드

그림 6. 구형체 성장 분석은 강건성과 재현성을 보여줍니다. 

Incucyte^® VesselView는 세 가지 구형체 유형(폐 암종, 섬유육종, 난소 암종)의 마스킹된 밝은 필드 영역을 네 가지 세포 밀도에서 보여줍니다. 히스토그램은 이 시점에서 웰당 2,500개 세포로 플레이팅된 모든 세포 유형에 걸쳐 밝은 필드 영역(μm2)의 분포 빈도를 비교합니다. 변동성 플롯 분석은 240시간에서 개별 웰의 가장 큰 밝은 필드 객체 영역을 보여줍니다. 시간 경과 플롯은 세포 유형에 걸쳐 가장 큰 밝은 필드 객체 영역 지표(μm2)의 차별적 시간 프로파일을 나타냅니다. 데이터는 240시간 동안 6시간 간격으로 수집되었으며, 모든 이미지는 10배 확대에서 캡처되었습니다.

그림 7. 생리학적으로 관련된 조건에서 강력한 약리학적 분석 수행 

싸토리우스 세포주인 SKOV-3 세포의 구형 배양에서 캄프토테신(CMP), 시스플라틴(CIS), 옥살리플라틴(OXA)의 성장 억제 효과를 조사했습니다. SKOV-3 세포를 웰당 5,000개 세포 밀도로 배양하고 72시간 동안 구형 조직을 형성하도록 했습니다. 이후 다양한 농도의 화합물로 처리하고 구형 조직의 성장 속도를 측정했습니다. 마이크로플레이트 그래프는 개별 웰의 가장 큰 밝은 영역(µm2)을 시간에 따라 보여줍니다. 농도-반응 곡선은 처리 후 204시간의 가장 큰 밝은 영역(µm2)을 나타냅니다. 데이터는 240시간 동안 6시간 간격으로 수집되었으며, 각 데이터 포인트는 평균 ±표준오차(n=8)를 나타냅니다.

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자동화된 이미지 획득 및 분석 도구는 '설정 후 자동 진행' 경험을 제공합니다. 실험 진행 상황을 원격으로 모니터링하고 신속한 의사결정을 위해 실시간으로 분석할 수 있습니다.