Incucyte® 세포독성 분석을 통한 생세포 분석

세포독성은 세포 건강에 해로운 영향을 미치며, 대사, 성장을 방해하거나 세포 사멸을 유발합니다. '괴사성' 사멸은 세포 용해를 포함하고, '아포토시스'는 통제된 과정이며, '자가포식'은 자가 소화를 수반합니다. 세포막 무결성 상실은 세포 사멸로 이어집니다.

Incucyte® 세포독성 분석법은 세포막 무결성을 기반으로 실시간 세포 사멸을 측정하기 위해 Incucyte® 세포독성 염료를 사용합니다.

Incucyte® 세포독성 염료로 발견을 가속화하세요

  

많은 세포독성 분석법은 건강한 세포에서 제외되는 생체 염료(예: 트립판 블루 또는 프로피디움 요오드화물) 또는 죽어가는 세포로부터의 마커 방출을 통해 세포막 무결성을 측정합니다. 대사 활성 측정(예: MTT, LDH 또는 ATP 분석)도 세포 건강과 생존력을 측정하는 데 사용됩니다. 그러나 이러한 방법에도 불구하고, 시간에 따른 죽어가는 세포 수를 직접 계산하는 방법은 거의 없습니다.

세포독성을 위한 솔루션

Incucyte® 세포독성 염료

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인큐사이트® 사이토톡스 그린 염료 (4633)

죽어가는 세포를 녹색으로 표시

인큐사이트® 사이토톡스 레드 염료 (4632)

죽어가는 세포를 빨간색으로 표시

인큐사이트® 사이토톡스 NIR 염료 (4846)

근적외선 영역에서 죽어가는 세포 표지

Incucyte® 세포독성 분석 개요

Incucyte® 생세포 분석 시스템은 조직 배양 배양기 내에서 실시간 자동 세포독성 분석을 가능하게 합니다.

Incucyte® 세포독성 분석은 세포막 무결성을 기반으로 세포 사멸을 실시간으로 측정하기 위해 Incucyte® 세포독성 염료를 사용합니다.

조직 배양 성장 배지에 첨가되면, Incucyte® 세포독성 염료는 불활성이고 비형광성이며 생존 세포에 들어가지 않습니다. 세포가 죽고 막 무결성이 상실되면, Incucyte® 세포독성 염료가 세포 내로 들어가 핵을 형광으로 표지합니다. 죽어가는 세포는 녹색/적색/NIR로 표지된 핵의 출현을 통해 시간에 따라 식별 및 정량화됩니다. 고해상도 위상차 대비 이미지와 동영상은 형태학적 기반(예: 세포골격 구조 상실, 운동성 상실)의 세포 사멸에 대한 추가 검증을 제공합니다.

 

Incucyte® 세포독성 분석 개념

  • 배양 중인 세포에 믹스-앤-리드 Incucyte® 세포독성 염료를 추가하여 실시간으로 세포독성 감지
  • 직관적인 Incucyte® 생세포 이미징 및 분석 도구를 사용하여 죽어가는 세포 수를 자동으로 정량화
  • Incucyte® Nuclight 핵 표지 시약, Incucyte® Caspase 3/7 염료 또는 Incucyte® Annexin V 염료와 결합하여 증식 또는 세포자멸사 측정과 함께 다중 세포독성 판독

종양, 면역 또는 신경세포 배양에서 Incucyte® 세포독성 분석을 사용하여 세포독성 측정하기

세포독성 약물 캄프토테신 처리 후 HT-1080 섬유육종 세포의 실시간 세포독성 검출. 죽어가는 세포는 실시간으로 믹스 앤 리드 Incucyte® 세포독성 그린 염료로 표시됨

Incucyte® 세포독성 레드 염료로 333 μM 글루타메이트로 처리된 죽은 쥐 전뇌 신경세포 표지

Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템을 이용한 세포독성 분석

세포막 무결성을 동역학적으로 측정하기 위해 라이브 세포 분석 방법이 개발되었습니다. 그러나 유연하고 정확한 평가를 위해서는 최적화된 기술과 시약이 필요합니다. Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템을 Incucyte® 세포독성 염료와 함께 사용하면, 세포독성 측정을 위한 라이브 세포 동역학 분석으로 세포 사멸의 특징인 세포 투과성을 정량적이고 재현 가능하게 검출할 수 있습니다.

이 접근법은 생리학적으로 관련된 조건에서 형태학적 변화를 정량화와 동시에 모니터링할 수 있는 능력을 제공합니다. Incucyte® 세포독성 염료를 Incucyte® 핵광 시약 또는 세포주와 결합하면 증식과 세포독성의 다중 측정이 가능합니다.

Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템 살펴보기

Incucyte® 세포독성 분석의 주요 장점

세포독성을 시각화하고 정량화하기

Incucyte® 세포독성 분석을 사용하여 실시간으로 세포 사멸 과정을 캡처하고 정량화하여 세포의 세포독성을 모니터링하세요.

배양기 내 세포 사멸 과정의 자동 분석

세포의 시간경과 이미징 및 자동 데이터 분석으로 처리 효과가 언제 어떻게 발생했는지 간단하고 쉽게 파악할 수 있습니다.

간단한 혼합 및 판독 96/384 웰 프로토콜 - 세척, 고정, 리프팅 불필요

Incucyte® 세포독성 염료는 비교란성이며 세포 사멸의 간단한 혼합 및 판독, 실시간 정량에 적합한 고감도 염료입니다.

증식 및 세포자멸사 측정과 다중화

Incucyte® Nuclight 핵 표지 시약, Caspase 또는 Annexin 염료를 사용하여 증식 및 세포자멸사의 다중 측정 수행

세포독성 분석을 위한 예시 데이터

세포독성을 시각화하고 정량화하기

시간에 따른 세포 사멸을 관찰하고 직관적인 Incucyte® 통합 이미지 분석 도구를 사용하여 세포 독성을 측정하세요. 이미지와 동영상으로 치료 효과를 검증하세요.

주르캇 세포(20,000개/웰)를 Incucyte® Cytotox NIR 염료 존재 하에 3 µM CMP로 처리했습니다. 이미지는 실험 기간 동안 20배율로 2시간마다 획득되었습니다. 대표적인 위상차 및 혼합 형광 이미지(NIR을 파란색 의사 색상으로; 상단 행)와 Incucyte® 통합 이미지 분석 도구를 사용하여 생성된 분할 마스크(빨간색; 하단 행)가 시간에 따라 표시됩니다(0-24시간). Incucyte® Cytotox NIR 염료의 핵산 결합 증가를 NIR 객체 수로 측정합니다(0시간에 8개 대비 24시간에 556개 객체/이미지). Incucyte® Cytotox 염료의 형광 신호는 세포 사멸과 관련된 형태학적 변화와 상관관계를 가집니다.

배양기 내 세포 사멸 과정의 자동 분석

세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 치료 효과가 발생한 시기와 방법을 결정 - 장기 연구(0~<10일)에 이상적입니다.

(상단). 시간 경과는 농도 의존적 치료 효과를 보여줍니다 (하단 왼쪽). 약리학을 비교하기 위해 데이터를 농도-반응 곡선으로 변환합니다 (하단 오른쪽).

간단한 혼합 및 판독 96/384 웰 프로토콜 - 세척, 고정, 리프팅 불필요

플레이트 셀에 Incucyte 세포독성 분석법 및 Incucyte 세포독 염료를 처리하고 Incucyte 생세포 분석 시스템에서 동역학적으로 측정하세요. 한 번에 최대 6개의 384-웰 플레이트를 중간/고처리량 스크리닝으로 읽을 수 있습니다.

Incucyte 세포독 염료 제품 가이드 보기

그림 3. Incucyte 세포독성 분석법을 위한 부착성 세포주 프로토콜.


증식 및 세포자멸사 측정과 다중화

Incucyte® 세포독성 분석을 Incucyte® Nuclight 핵 염색 시약, Caspase-3/7 염료 또는 Annexin V 염료와 결합하여 증식/세포사멸의 다중 측정을 수행하세요. 세포독성 및 세포정지 처리 효과를 쉽게 구분할 수 있습니다.

Incucyte® Cell-by-Cell 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 라벨 프리 증식을 캡처하고, 형광을 기반으로 개별 세포 분할 및 분류를 가능하게 합니다. Incucyte® 소프트웨어 내에서 세포독성 또는 세포사멸 지수를 계산하세요.

Incucyte® Nuclight Red 렌티바이러스로 표지된 HT-1080 섬유육종 세포에 캄프토테신(150 nM)을 처리하고, 시간에 따른 생존/사멸 세포를 감지하기 위해 Incucyte® Cytotox Green 염료를 사용한 실험

Incucyte® Cytotox Green 염료 존재 하에 24시간 동안 캄프토테신(1 µM) 또는 사이클로헥시미드(1 µM)로 처리된 HT-1080 섬유육종 세포(사멸된 세포의 마스킹 표시). 초록색(사멸) 세포군을 식별하는 분류 도표(두 번째 열), 시간 경과 도표(세 번째 열) 및 농도-반응 곡선(네 번째 열)은 세포독성 및 세포정지 화합물의 효과 차이를 보여줍니다.


세포독성 분석 기술 자료

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인큐사이트 세포독성 분석 키트의 유용성 탐색: 세척 불필요, 혼합 및 판독 시약, 이미지 기반 분석 도구 포함

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라이브 세포 분석을 이용한 가속화된 TCID50 분석

정확성을 높이고, 수동 단계를 줄이며, 배양 시간을 단축하는 염색 없는 바이러스 감염성 평가 방법

제품 리소스

Brochure: Incucyte® — Reagents, Consumables and Software
브로셔

Incucyte® — 시약, 소모품 및 소프트웨어

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사용자 가이드

Incucyte® 세포독성 염료

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세포독성 자주 묻는 질문

네. 복잡하고 조직과 유사한 관계의 세포 상호작용은 공동 배양을 통해 시험관 내에서 연구할 수 있으며, 세포 사멸은 세포 자멸과 막 무결성의 표지자로 추적할 수 있습니다. 가장 의미 있는 데이터를 위해 세포 증식과 세포 사멸은 생세포 이미징으로 동일한 배양에서 동시에 모니터링될 수 있습니다.

공동 배양 실험 전체에서 특정 세포 유형을 추적하려면 먼저 NucLight 시약 중 하나로 세포를 형질 도입하여 사용된 Cytotox 시약과 다른 색상인지 확인하세요. 세포는 성장하여 밀집하고 상호작용하는 배양체를 형성하며, Cytotox 또는 Caspase 3/7 시약으로 세포 사멸을 모니터링합니다.

참고: NucLight 시약으로 형질 도입된 세포만이 아니라 모든 죽은 세포와 죽어가는 세포는 Cytotox 또는 Caspase 3/7 시약에 양성 반응을 보입니다.

세포독성 분석에서 세포 사멸을 예측하는 가장 일반적으로 사용되는 방법은 온전한 지질 이중층에 투과되지 않는 시약을 사용하는 것입니다. 세포 사멸 연쇄 반응이 시작되면 지질 이중층이 다공성이고 누출성이 되어 시약이 세포 내부로 들어가 핵을 염색합니다. 다른 분석법들은 세포 사멸의 다양한 단계와 형태를 감지할 수 있습니다. 세포자멸사 분석법은 활성화된 caspase와 Annexin V와 같은 죽어가는 세포의 특정 표지자를 감지합니다.

세포독성 검정 프로토콜 보기

세포고사 검정에 대해 자세히 알아보기
 

언급하신 세 가지 검정은 상호 배타적이지 않습니다. 세포독성(또는 세포독) 검정은 세포 증식 또는 세포 이동 검정과 쉽게 함께 측정할 수 있습니다. 유의해야 할 유일한 요인은 동시에 모든 검정의 판독값을 모니터링할 수 있는 충분한 이미징 채널이 필요하다는 것입니다. Incucyte®를 사용한 생세포 이미징의 경우, 세포 밀집도(형광 색소가 필요 없음), 주화성(빨간색 또는 녹색 채널), 그리고 세포독성(나머지 채널)을 추적할 수 있습니다.

전자 피펫은 흡입 및 분주를 자동으로 처리하여 인적 변동성을 줄입니다. 다양한 피펫팅 모드로 작업 속도를 높입니다. 또한 교정 알림 및 저장된 프로그램에 대한 비밀번호 보호와 같은 보안 기능을 제공합니다.

세포독성 검사의 범위는 매우 광범위하여 모든 세포독성 검사 방법에 적용되는 답변을 제공하기는 불가능합니다. 그러나 시각적 인식 요소와 형광 강도 요소를 포함하는 방법의 경우, 세포자멸사를 겪는 여러 세포와 단일 세포의 용해를 구분할 수 있습니다. 다중화된 특정 세포자멸사 검사는 세포자멸사 연쇄 반응의 시작이나 지질 막의 변형을 포함하여 더 세부적인 정보를 제공할 수 있습니다. 신호가 완전히 누적되는 ELISA와 같은 검사는 이러한 세부 사항을 제공할 수 없습니다.

이 문제의 일반적인 이유는 세포 사멸 분석 중 세포 성장이 계속되어 웰 내에서 과밀집이 발생하는 것입니다. 세포독성 분석을 위해 세포를 배양할 때는 정확한 세포 수를 확보하고, 세포가 최종 시점 전에 접촉 억제(100% 밀집도 도달)되지 않도록 주의해야 합니다.

때때로 세포독성 물질은 치명적이지 않은 농도에서 세포 증식을 자극하는 역설적인 효과를 가질 수 있습니다. 귀하의 세포와 세포독성 물질 조합에서 이러한 효과가 지속적으로 관찰된다면, 이것이 그 설명일 수 있습니다.

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