cytotoxicity assays

Incucyte® 생세포 분석용 세포독성 검사

세포독성 평가를 위한 생세포 분석법 소개 영상

Incucyte® 생세포 분석용 세포독성 검사

세포독성은 세포 건강에 해로운 영향을 미치는 것을 말하며, 신진대사, 성장 또는 세포 사멸을 유발합니다. '괴사성' 사멸은 세포 용해를 수반하고, '세포자멸사'는 조절된 사멸이며, '자가포식'은 세포 스스로를 분해하는 것을 의미합니다. 세포막의 완전성 손상은 세포 사멸로 이어집니다.

Incucyte® 세포독성 분석법은 Incucyte® 세포독성 염료를 사용하여 세포막의 완전성을 기반으로 세포 사멸을 실시간으로 측정합니다.

Incucyte® 세포독성 염료로 연구 속도를 높이세요

  

세포독성 검사법 중 다수는 세포막의 완전성을 측정하는데, 이는 건강한 세포에서는 배제되는 생체 염색약(예: 트립판 블루 또는 프로피디움 아이오다이드)을 사용하거나, 사멸하는 세포에서 방출되는 표지자(예: 세포 프로테아제)를 이용하는 방식입니다. 대사 활동 측정(예: MTT, LDH 또는 ATP 분석) 또한 세포의 건강과 생존력을 측정하는 데 사용됩니다. 그러나 이러한 방법들에도 불구하고, 시간에 따른 사멸 세포 수를 직접 계수하는 방법은 거의 없습니다.

세포독성 해결책

Incucyte® Cytotox 염료를 구입하세요.

인큐사이트®Cytotox 염료는 Incucyte와 함께 사용하기에 적합하도록 완벽하게 검증되었습니다.®생세포 분석 시스템 및 세포독성 분석법을 제공합니다. 또한, 당사의 Incucyte 제품군과 결합하여 사용할 수 있습니다.®Nuclight 핵 표지 시약, Incucyte®카스파제 3/7 염료 또는 인큐사이트®Annexin V 염료는 단일 웰에서 세포 증식 및 세포 사멸과 세포 독성을 동시에 측정할 수 있도록 설계되었습니다.

Incucyte® 사이토톡스 그린 염료(4633)

죽어가는 세포를 녹색으로 표시합니다.

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Incucyte® 사이토톡스 적색 염료(4632)

죽어가는 세포를 빨간색으로 표시합니다.

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Incucyte® Cytotox NIR 염료(4846)

근적외선으로 죽어가는 세포를 표지합니다

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Incucyte® 세포독성 분석 개요

Incucyte® 생세포 분석 시스템은 조직 배양기 내에서 실시간 자동화 세포독성 분석을 가능하게 합니다.

Incucyte® 세포독성 분석법은 Incucyte® 세포독성 염료를 사용하여 세포막의 완전성을 기반으로 세포 사멸을 실시간으로 측정합니다.

When added to the tissue culture growth medium, Incucyte® Cytotox Dyes are inert, non-fluorescent and do not enter viable cells. As cells die and membrane integrity is lost, the Incucyte® Cytotox Dye enters the cell and fluorescently labels the nuclei. Dying cells are identified and quantified over time by the appearance of green/red/NIR labeled nuclei. High-definition phase contrast images and movies provide an additional validation of cell death based on morphology (e.g. loss of cytoskeleton structure, loss of motility).

 

Incucyte® 세포독성 분석 개념

  • 혼합 후 판독이 가능한 Incucyte® 세포독성 염료를 배양액에 첨가하여 실시간으로 세포독성을 감지하세요.
  • 직관적인 Incucyte® 실시간 세포 이미징 및 분석 도구를 사용하여 죽어가는 세포 수를 자동으로 정량화하세요.
  • Incucyte® Nuclight 핵 표지 시약, Incucyte® Caspase 3/7 염료 또는 Incucyte® Annexin V 염료와 조합하여 증식 또는 세포 사멸 측정을 통한 다중 세포 독성 판독이 가능합니다.

Incucyte® 세포독성 분석법을 사용하여 종양, 면역 또는 신경 세포 배양에서 세포독성을 측정하십시오.

세포독성 약물인 캄토테신으로 처리한 HT-1080 섬유육종 세포의 세포독성을 실시간으로 검출했습니다. 사멸하는 세포는 Incucyte® Cytotox Green Dye를 사용하여 실시간으로 녹색으로 염색됩니다.

Incucyte® Cytotox Red Dye는 333 μM 글루타메이트로 처리된 죽은 쥐의 전뇌 뉴런을 표지합니다.

Incucyte® 생세포 분석 시스템을 이용한 세포독성 분석

세포막 무결성을 동역학적으로 측정하기 위해 생세포 분석법이 개발되었습니다. 그러나 유연하고 정확한 평가를 위해서는 최적화된 기술과 시약이 필요합니다. Incucyte® 생세포 분석 시스템과 Incucyte® 세포독성 염료를 함께 사용하면 세포 독성을 측정하는 생세포 동역학 분석법으로 세포 사멸의 주요 지표인 세포 투과성을 정량적이고 재현성 있게 검출할 수 있습니다.

이러한 접근 방식은 생리학적으로 적합한 조건에서 정량화와 병행하여 형태학적 변화를 모니터링할 수 있는 기능을 제공합니다. Incucyte® Cytotox 염료와 Incucyte® Nuclight 시약 또는 세포주를 조합하면 증식 및 세포독성을 다중으로 측정할 수 있습니다.

Incucyte® 생세포 분석 시스템을 살펴보세요.

Incucyte® 세포독성 검사의 주요 장점

타임랩스 이미징을 이용하여 세포 독성을 시각화하고 정량화합니다.

Incucyte® 세포독성 분석 키트를 사용하여 세포 사멸을 실시간으로 포착하고 정량화함으로써 세포 내 세포독성을 모니터링하십시오.

배양기 내 세포 사멸 과정의 시간 경과를 자동 분석합니다.

세포의 시간 경과 영상 촬영과 자동화된 데이터 분석을 통해 치료 효과가 언제 어떻게 나타났는지 간단하고 쉽게 파악할 수 있습니다.

세척, 고정, 리프팅 과정이 필요 없는 간편한 혼합 및 판독 방식의 96/384웰 프로토콜

Incucyte® 세포독성 염료는 세포 사멸을 실시간으로 정량화하는 데 적합한, 혼합 후 판독이 간편한 비파괴적이고 고감도 염료입니다.

세포 증식 및 세포 사멸 측정을 포함하는 멀티플렉스 분석

Incucyte® Nuclight 핵 표지 시약, 카스파제 또는 안넥신 염료를 사용하여 세포 증식 및 세포 사멸을 다중 측정합니다.

세포독성 분석 예시 데이터

타임랩스 이미징을 이용하여 세포 독성을 시각화하고 정량화합니다.

Incucyte®의 직관적인 통합 이미지 분석 도구를 사용하여 시간에 따른 세포 사멸을 관찰하고 세포 독성을 측정하십시오. 이미지와 동영상을 통해 치료 효과를 검증하십시오.

Jurkat 세포(웰당 20,000개 세포)에 Incucyte® Cytotox NIR 염료 존재 하에 3 µM CMP를 처리했습니다. 실험 기간 동안 2시간 간격으로 20배율로 이미지를 촬영했습니다. 대표적인 위상차 이미지와 혼합 형광 이미지(NIR 의사색상 파란색; 위쪽 행) 및 Incucyte® 통합 이미지 분석 도구를 사용하여 생성된 분할 마스크(빨간색; 아래쪽 행)를 시간에 따라(0~24시간) 보여줍니다. Incucyte® Cytotox NIR 염료에 의한 핵산 결합 증가는 NIR 객체 수(0시간 8개 vs. 24시간 이미지당 556개)로 측정되었습니다. Incucyte® Cytotox 염료의 형광 신호는 세포 사멸과 관련된 형태학적 변화와 상관관계가 있습니다.

배양기 내 세포 사멸 과정의 시간 경과를 자동 분석합니다.

세포를 배양기의 안정적인 환경에서 꺼내지 않고 치료 효과가 언제 어떻게 나타났는지 확인할 수 있습니다. 이는 장기 연구(0일~10일 미만)에 이상적입니다.

(상단). 시간 경과에 따른 치료 효과는 농도에 따라 달라집니다(하단 왼쪽). 약리학적 효과를 비교하기 위해 데이터를 농도-반응 곡선으로 변환합니다(하단 오른쪽).

세척, 고정, 리프팅 과정이 필요 없는 간편한 혼합 및 판독 방식의 96/384웰 프로토콜

세포를 배양 접시에 담고, Incucyte® 세포독성 분석 키트와 Incucyte® 세포독성 염색 시약을 첨가한 후, Incucyte® 생세포 분석 시스템에서 반응 속도를 측정합니다. 최대 6개의 384웰 플레이트를 동시에 분석하여 중/고처리량 스크리닝이 가능합니다.

Incucyte® Cytotox 염료 제품 안내서를 참조하십시오.

그림 3. Incucyte® 세포독성 분석을 위한 부착 세포주 프로토콜.


세포 증식 및 세포 사멸 측정을 포함하는 멀티플렉스 분석

Incucyte® 세포독성 분석 키트를 Incucyte® Nuclight 핵 표지 시약, Caspase-3/7 염료 또는 Annexin V 염료와 함께 사용하여 세포 증식/세포 사멸을 다중으로 측정할 수 있습니다. 세포독성 및 세포 증식 억제 효과를 쉽게 구분할 수 있습니다.

Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 라벨 없이 세포 증식을 포착하고, 형광을 기반으로 개별 세포를 분할 및 분류할 수 있습니다. Incucyte® 소프트웨어 내에서 세포독성 또는 세포사멸 지수를 계산할 수 있습니다.

캄토테신(150 nM)으로 처리한 HT-1080 섬유육종 세포(Incucyte® Nuclight Red Lentivirus로 표지됨)를 Incucyte® Cytotox Green 염료 존재 하에 시간에 따른 생/사 세포를 검출하였다.

캄토테신(1 µM) 또는 시클로헥시미드(1 µM)로 처리한 HT-1080 섬유육종 세포를 Incucyte® Cytotox Green 염료 존재 하에 24시간 동안 배양하여 생세포/사세포를 검출하였다(사세포는 마스킹 처리). 녹색(사세포) 집단을 식별하는 분류 플롯(두 번째 열), 시간 경과 플롯(세 번째 열) 및 농도-반응 곡선(네 번째 열)은 세포독성 및 세포증식 억제제의 효과 차이를 보여준다.


세포독성 분석 기술 자료

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Incucyte® — 시약, 소모품 및 소프트웨어

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Incucyte® 세포독성 염료

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세포독성 관련 자주 묻는 질문

네. 복잡한 조직 유사 관계에서 세포들의 상호작용은 공동 배양을 통해 시험관 내에서 연구할 수 있으며, 세포 사멸은 세포 사멸 표지자와 세포막 완전성 지표를 이용하여 공동 배양에서 추적할 수 있습니다. 가장 의미 있는 데이터를 얻으려면, 생세포 이미징을 통해 동일한 배양액에서 세포 증식과 세포 사멸을 동시에 관찰할 수 있습니다.

공동 배양 실험 전반에 걸쳐 특정 세포 유형을 추적하려면 먼저 NucLight 시약 중 하나로 세포를 형질전환시키되, 사용하는 Cytotox 시약과 색상이 다른 것을 선택해야 합니다. 세포는 성장하여 밀집된 상호작용 배양체를 형성하며, 세포 사멸은 Cytotox 또는 Caspase 3/7 시약을 사용하여 모니터링할 수 있습니다.

참고: 죽거나 죽어가는 모든 세포는 NucLight 시약으로 형질전환된 세포뿐만 아니라 Cytotox 또는 Caspase 3/7 시약에 양성 반응을 보입니다.

세포독성 검사에서 세포 사멸을 예측하는 가장 일반적인 방법은 손상되지 않은 지질 이중막을 투과하지 못하는 시약을 사용하는 것입니다. 세포 사멸 과정이 시작되면 지질 이중막이 다공성이 되어 투과성이 높아지고, 시약이 세포 내부로 침투하여 핵을 염색합니다. 다른 검사법들은 세포 사멸의 다양한 단계와 형태를 감지할 수 있습니다. 세포 사멸 검사는 활성화된 카스파제 및 안넥신 V와 같은 사멸하는 세포의 특정 표지자의 존재를 감지합니다.

세포독성 분석 프로토콜을 참조하십시오.

세포 사멸 분석에 대해 자세히 알아보세요.
 

언급하신 세 가지 분석법은 상호 배타적이지 않습니다. 세포독성(또는 세포독성) 분석은 세포 증식 또는 세포 이동 분석과 함께 쉽게 측정할 수 있습니다. 다만 모든 분석 결과를 동시에 모니터링할 수 있도록 충분한 이미징 채널이 필요하다는 점을 유념해야 합니다. Incucyte®를 사용한 생세포 이미징의 경우, 세포 밀집도(형광 염료 불필요), 화학주성(적색 또는 녹색 채널), 그리고 세포독성(나머지 채널)을 추적할 수 있습니다.

전자 피펫은 흡입 및 분주 작업을 자동으로 처리하여 사람의 조작 오류를 줄여줍니다. 다양한 피펫팅 모드를 통해 작업 속도를 높여줍니다. 또한, 전자 피펫은 교정 알림 및 저장된 프로그램에 대한 비밀번호 보호와 같은 보안 기능을 제공합니다.

세포독성 분석법의 범위가 매우 넓기 때문에 모든 분석법에 적용되는 답변을 제공하는 것은 불가능합니다. 그러나 형광 강도 측정과 시각적 인식 요소를 함께 사용하는 방법의 경우, 다수의 세포가 세포사멸을 겪는 상황과 단일 세포가 용해되는 상황을 구분할 수 있습니다. 특히 세포사멸 특이적 분석법은 다중 분석을 통해 세포사멸 연쇄반응의 시작이나 지질막의 손상과 같은 더욱 세밀한 신호까지 제공할 수 있습니다. 신호가 완전히 누적되는 ELISA와 같은 분석법으로는 이러한 세부적인 정보를 얻을 수 없습니다.

이 문제의 일반적인 원인은 세포 사멸 분석 과정 내내 세포가 계속 증식하여 배양 접시가 과밀해지는 것입니다. 세포 독성 분석을 위해 세포를 배양할 때는 정확한 세포 수를 확인하고, 분석 종료 시점 이전에 세포가 접촉 억제(100% 밀집도)에 도달하지 않도록 너무 많은 세포를 접종하지 마십시오.

때때로 세포독성 물질은 치사량 미만의 농도에서 세포 증식을 촉진하는 역설적인 효과를 나타낼 수 있습니다. 만약 사용하시는 세포와 세포독성 물질의 조합에서 이러한 효과가 반복적으로 관찰된다면, 이것이 그 원인일 수 있습니다.