Incucyte^® EV 흡수 분석법(생세포 분석용)

Incucyte^® Exofluor EV 라벨링 키트는 세포 내 소포체(EV) 흡수를 실시간으로 동적으로 평가할 수 있도록 하며, Green | Red 또는 Green | Orange | Near-IR 광학 모듈이 장착된 Incucyte^® 라이브 셀 분석 시스템과의 호환성이 검증되었습니다. Incucyte^® Exofluor EV 라벨링 염료는 단백질 및 아미노산에 공유 결합하여 작은 EV(예: 엑소좀)의 세포막을 균일하게 라벨링합니다. EV에 대한 비가역적 결합과 유리 염료의 제거는 흡수 전 또는 흡수 중에 다른 세포막에 염료가 비특이적으로 부착될 위험을 줄여줍니다.

Incucyte^® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 세포와 비부착성 세포가 혼합된 배양 환경에 다양한 응용 프로그램을 제공합니다. 부착성 세포와 비부착성 세포에 대한 라벨 없는 세포 계수를 수행하고, 모양, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 세포별 분류를 통해 혼합 배양 내 하위 집단의 동적 변화를 정량화하여 새로운 발견의 세계를 열어줍니다.

제품 번호: 9600-0031

자세히 알아보기

Incucyte^® 생세포 분석 시스템은 엑소좀 및 세포외 소포(EV)를 연구하는 연구자들에게 강력한 도구입니다. 실시간 이미지 획득 및 분석과 EV 흡수 분석을 결합하여 역동적인 세포 변화에 대한 통찰력을 제공합니다. EV 흡수 데이터와 세포 형태, 기능 및 건강 상태 측정값을 결합하면 단일 웰에서 다양한 처리 또는 배양 조건이 EV 흡수에 미치는 영향에 대한 귀중한 정보를 얻을 수 있습니다. Incucyte^® 생세포 분석 시스템, 통합 소프트웨어 및 Incucyte^® Exofluor EV 라벨링 키트는 생세포에서 엑소좀 및 EV를 연구하는 데 크게 도움이 되는 포괄적인 접근 방식을 제공합니다.

Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 살펴보세요.

A549 엑소좀(웰당 2 µg, HansaBioMed)에 Incucyte^® Exofluor 염료를 사용하여 표지했습니다. 표지된 엑소좀의 흡수는 다양한 세포 유형과 배지 조건에서 시각화할 수 있습니다(상단 행). 각 조건에 대한 염료만 첨가한 대조군 웰은 형광 신호가 잔류 유리 염료 때문이 아님을 보여줍니다(하단 행). 다양한 세포 유형에서 표지된 A549 유래 엑소좀으로 처리한 후 24시간 후에 촬영한 이미지는 대조군과 비교하여 세포 형태의 변화가 없음을 보여줍니다.

이미지는 Incucyte^® Exofluor Green으로 표지된 다양한 EV가 A549 수용 세포에 흡수되는 것을 보여줍니다(처리 후 24시간). A549 엑소좀은 초여과 및 SEC 방법(HansaBioMed)을 사용하여 추출하고 웰당 2 µg의 농도로 처리했습니다. 사람 혈장 유래 엑소좀(Abcam, 초여과 추출법)은 웰당 4 µg의 농도로 사용했습니다. MSC 및 HEK293T EV(Sartorius)는 TFF/IEX 크로마토그래피를 사용하여 추출하고 각각 웰당 1.5 x 10¹⁰ 및 8.3 x 10¹⁰ 입자의 농도로 처리했습니다.

이 키트에는 유리 염료 제거용 Vivaspin^® 컬럼과 Incucyte^® 생세포 분석 시스템 내 이미징 전 살균 및 응집물 제거용 Minisart^® 필터가 포함되어 있습니다.

HEK293T 세포에서 이온 교환 크로마토그래피(Sartorius)를 이용하여 EV를 정제하고, Incucyte^® Exofluor Green EV Labeling Kit를 사용하여 표지한 후 A549 흡수 세포에 첨가했습니다. 위상차 및 녹색 형광 이미지를 2일 동안 2시간 간격으로 촬영하고 Incucyte^® Cell-by-Cell 소프트웨어를 사용하여 분석했습니다. 표지된 EV를 약 40배(4.2 x 10 ~ 1 x 10 입자/웰) 농도로 첨가하고 평균 녹색 형광 강도를 이용하여 흡수율을 평가했습니다. 농도에 따른 형광 강도 변화가 관찰되었습니다. 위상차 객체 수(t=0으로 정규화) 데이터는 모든 EV 농도에서 세포 증식에 변화가 없음을 보여줍니다.

그림 5. EV 흡수는 세포내이입에 의존한다.:  A549 Cells were seeded overnight and then treated with the endocytosis inhibitor Dynasore (0.01 to 100 µM) in exosome-free culture medium.  Immediately following Dynasore treatment, Hansa A549 exosomes labeled with Incucyte^® Exofluor Green Dye (2 µg/well) were added.  A concentration-dependent inhibition (IC₅₀ = 2.72 µM) of exosome uptake was reflected in the intensity of green fluorescence (24-hour data shown).