Incucyte® image showing cells with green fluorescence signal from EV Uptake Assay

인큐사이트® EV 흡수 분석을 통한 생세포 분석

Incucyte® EV 흡수 분석 생세포 분석

엑소좀과 세포외 소포(EVs)는 세포 간 지질, 핵산, 단백질을 운반하는 작은 막 결합 소포로, 세포 간 통신에 크게 기여합니다. 이들은 세포 신호 전달, 질병 진행, 치료 전달의 핵심 매개체로 부각되었으며, 암, 신경퇴행성 질환, 심혈관 질환의 분자 메커니즘에서 중요한 역할을 한다는 것이 입증되었습니다. 연구에 따르면 EVs는 모세포로부터 단백질, 핵산, 기타 분자를 운반할 수 있는 능력으로 인해 고가치 진단 및 치료 도구(예: 바이오마커 또는 정밀 의학 전달을 위해 엔지니어링된 도구)로서 잠재력을 가지고 있습니다.

다양한 연구 분야에서 엑소좀과 세포외 소포체(EVs)의 중요성을 고려할 때, 생세포로의 흡수를 평가할 수 있는 신뢰할 수 있는 분석 방법에 대한 필요성이 증가하고 있습니다.

  • 귀중한 엑소좀과 그 기능성 손실로 이어지는 복잡한 프로토콜
  • 단일 시점으로 측정을 제한하는 종료점 분석
  • 세포 건강에 대한 잠재적 오염 또는 교란으로 인해 생세포 분석에 최적화되지 않음
  • 세포의 무차별적 라벨링으로 인한 EV 흡수의 신뢰할 수 없는 동역학적 측정

Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트는 Incucyte® 생세포 분석 시스템과 함께 사용하도록 최적화되어 있으며, 동일한 세포 집단 내에서 세포 내 EV 흡수를 실시간으로 측정하여 생물학적 기능을 모니터링할 수 있습니다. 이러한 키트를 통해 연구자들은 향후 치료제 개발을 지원하는 EV 흡수 메커니즘에 대한 귀중한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

 

Incucyte® 생세포 이미징 및 분석 장비 탐색
Incucyte® 시약 발견

EV 흡수 분석을 위한 솔루션

Incucyte® EV 흡수 분석 개요

Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트는 세포 EV 흡수를 방해하지 않고 실시간으로 동적으로 평가할 수 있게 하며, Green | Red 또는 Green | Orange | Near-IR 광학 모듈이 구성된 Incucyte® 생세포 분석 시스템과 함께 사용할 수 있도록 검증되었습니다. Incucyte® Exofluor EV 라벨링 염료는 단백질 및 아미노산에 공유 결합하여 소형 EV(예: 엑소좀)의 세포막을 균일하게 표지합니다. 자유 염료 제거와 결합된 EV에 대한 비가역적 결합은 흡수 전후 다른 세포막에 비특이적 염료 부착 위험을 완화합니다.

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Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈

Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 및 비부착성 세포의 혼합 배양에 대한 다양한 응용 프로그램을 가능하게 합니다. 부착성 및 비부착성 세포에 대해 라벨 없는 세포 계수를 수행하고, 형태, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 세포별 분류를 수행하여 혼합 배양 내 세부 집단의 동적 변화를 정량화하고, 새로운 발견의 세계를 열 수 있습니다.

카탈로그 번호 9600-0031

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Incucyte® SX5 Live-Cell Analysis System

Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템을 이용한 EV 흡수 분석

Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템은 엑소좀 및 EV를 연구하는 연구자들을 위한 강력한 도구입니다. 실시간 이미지 획득 및 분석 - EV 흡수 분석과 결합하여 - 동적인 세포 변화에 대한 통찰력을 제공합니다. EV 흡수 데이터를 세포 형태, 기능 및 건강 측정과 결합하면 단일 웰에서 다양한 처리 또는 배양 조건이 EV 흡수에 미치는 영향에 대한 귀중한 정보를 얻을 수 있습니다. Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템, 통합 소프트웨어 및 Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트는 라이브 세포에서 엑소좀 및 EV 연구를 크게 지원할 수 있는 포괄적인 접근 방식을 제공합니다.

Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템 탐색

Incucyte® EV 흡수 분석의 주요 장점

Incucyte® image showing cells with green fluorescence signal from EV Uptake Assay
Schematic of five steps in EV Uptake assay set up
IC50 curve showing EV uptake inhibition in response to Dynasore
신뢰할 수 있는 EV 흡수의 동적 측정 수행

개체군 수준에서 세포 내 EV 흡수 또는 숙주 세포의 형태학적 변화 관찰 및 평가


아래 예시 데이터 참조
   

다양한 소스의 EV와 함께 사용

다양한 추출 방법과 다른 공급원 세포로부터 균일하게 EV 레이블링

간단한 프로토콜로 EV와 생물학적 기능성 보존

EV를 보존하고 응집 및 자유 염료를 제거하는 쉽게 따라할 수 있는 분석 설정

화합물에 대한 반응으로 전기차(EV) 도입의 동적 변화 평가

EV의 기능적 흡수 및 동역학 측정 또는 후속 분석을 위한 균일한 표지 지원

EV 흡수 분석을 위한 예시 데이터

신뢰할 수 있는 EV 흡수의 동적 측정 수행

A549 엑소좀(웰당 2μg, HansaBioMed)은 Incucyte® Exofluor 염료를 사용하여 표지되었습니다. 표지된 엑소좀의 흡수는 다양한 세포 유형 및 배지 조건에서 시각화할 수 있습니다(상단 행). 각 조건의 염료만 대조 웰은 형광 신호가 잔류 자유 염료로 인한 것이 아님을 보여줍니다(하단 행). A549 유래 엑소좀으로 처리 후 24시간에 촬영된 이미지는 대조군과 비교하여 세포 형태에 변화가 없음을 보여줍니다.

다양한 소스의 EV와 함께 사용

이미지는 Incucyte® Exofluor Green으로 표지된 다양한 EV의 A549 수용체 세포에 의한 흡수를 보여줍니다(처리 후 24시간). A549 엑소좀은 한외여과 및 SEC 방법(HansaBioMed)을 사용하여 추출되었으며 웰당 2μg로 처리되었습니다. 인간 혈장 유래 엑소좀(Abcam, 한외여과 추출 방법)은 웰당 4μg 농도로 사용되었습니다. MSC와 HEK293T EV(Sartorius)는 TFF/IEX 크로마토그래피를 사용하여 추출되었으며 각각 웰당 1.5 x 108 및 8.3 x 107 입자로 처리되었습니다.

간단한 프로토콜로 EV와 생물학적 기능성 보존

키트에는 Incucyte 생세포 분석 시스템 내 이미징 전 자유 염료 제거를 위한 Vivaspin® 컬럼과 멸균 및 응집물 제거를 위한 Minisart® 필터가 포함되어 있습니다.

화합물에 대한 반응으로 전기차(EV) 도입의 동적 변화 평가

: EVs는 이온 교환 크로마토그래피(Sartorius)를 사용하여 HEK293T 세포로부터 정제되었으며, Incucyte® Exofluor Green EV 라벨링 키트를 사용하여 라벨링되었고 A549 흡수 세포에 추가되었습니다. 위상 및 녹색 형광 이미지는 2일 동안 2시간마다 획득되었으며 Incucyte® Cell-by-Cell 소프트웨어를 사용하여 분석되었습니다. 라벨링된 EVs는 약 40배(4.2 x 108에서 1 x 107 입자/웰) 적정되었으며, 평균 녹색 평균 강도를 사용하여 흡수가 평가되었습니다. 해당하는 농도 의존적 형광 변화가 관찰되었습니다. 위상 객체 수(t=0에 대해 정규화됨) 데이터는 테스트된 모든 EVs 농도에서 증식 변화가 없음을 보여줍니다.

: A549 세포를 밤새 배양한 후 무혈청 배지에서 엔도사이토시스 억제제 다이나소어(0.01~100 µM)로 처리했습니다. 다이나소어 처리 직후, Incucyte® Exofluor Green Dye(2 µg/well)로 표지된 Hansa A549 엑소좀을 추가했습니다. 농도 의존적 억제(IC50 = 2.72 µM)는 녹색 형광 강도로 반영되었습니다(24시간 데이터 표시).

EV 흡수 분석 기술 자료

3D illustration of cells shedding exosomes - stock image
애플리케이션 노트

생체의학 응용을 위한 엑소좀 활용

세포 내 분석을 이용한 세포외 소포 표지 및 세포 흡수에 대한 통찰

응용 노트 접근
3D illustration of cells shedding exosomes - stock image

세포외 소포의 비밀 해제

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제품 리소스

Incucyte® Exofluor Green EV 라벨링 키트 - Incucyte® 생세포 분석 시스템용

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Brochure: Incucyte® — Reagents, Consumables and Software
브로셔

Incucyte® — 시약, 소모품 및 소프트웨어

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인큐사이트 라이브-셀 분석 시스템 시약 및 소모품

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EV 도입 자주 묻는 질문

Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트는 다양한 방법(침전, 초여과, TFF/이온 교환 크로마토그래피 및 초원심분리 포함)으로 분리된 EV에 대해 검증되었습니다.

각 컬럼은 최대 40 µg의 단백질 또는 100 µL의 라벨링된 엑소좀 샘플을 처리할 수 있습니다. 더 높은 단백질 로딩 또는 샘플 볼륨은 멤브레인 막힘을 초래할 수 있으며, 100 µL를 초과하는 라벨링된 엑소좀 샘플은 배경 형광 증가를 야기할 수 있습니다.


단백질/웰당 1-4 µg 또는 5 x 107 - 1 x 109 입자/웰 범위 내에서 엑소좀을 사용하는 것을 권장합니다.


Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트에는 엑소좀/세포외소포가 포함되어 있지 않으며, 라벨링 염료, Vivaspin® 2, 및 Minisart® 필터만 포함되어 있습니다. 모든 엑소좀/세포외소포 및 기타 소모품은 고객이 제공해야 합니다.

당사의 분석 키트는 제공된 Vivaspin®2 컬럼 및/또는 Minisart® 필터와 함께 사용하도록 최적화 및 설계되었으며, 다른 소모품에서는 신호 강도와 교란 위험의 차이가 관찰되었습니다. 추가 컬럼이나 필터가 필요한 경우 Sartorius에서 구매하십시오(제품 가이드에 카탈로그 번호 제공, 팩 크기에 따라 다를 수 있음).


Incucyte® EV 흡수 분석은 흡수 동역학에 영향을 줄 수 있는 내재된 엑소좀의 존재를 최소화하기 위해 분석 배지에서 수행해야 합니다.

EV의 세 가지 하위 클래스가 있지만, 이 키트는 엑소좀으로 분류된 입자를 사용하여 검증되었습니다. 소포체나 사멸소체의 표지는 테스트하지 않았습니다.


세포별 분석을 강력히 권장합니다. 그러나 이 분석은 기본 분석기를 사용하여 수행할 수 있지만, 추가 최적화가 필요할 수 있습니다. 자세한 내용은 제품 가이드를 참조하십시오.


Incucyte® Exofluor EV 라벨링 키트는 Incucyte® CX3, SX5, S3 또는 SX1 생세포 분석 시스템에서 사용하기 위한 것입니다.

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