Incucyte^® EV 흡수 분석 (생세포 분석용)

Incucyte^® Exofluor EV 라벨링 키트는 세포 EV 흡수를 방해하지 않고 실시간으로 동적으로 평가할 수 있게 해주며, 녹색 | 빨간색 또는 녹색 | 주황색 | 근적외선 광학 모듈로 구성된 Incucyte^® 생세포 분석 시스템과 함께 사용할 수 있도록 검증되었습니다. Incucyte^® Exofluor EV 라벨링 염료는 단백질 및 아미노산에 공유결합하여 소형 EV(예: 엑소좀)의 세포막을 균일하게 염색합니다. 자유 염료 제거와 결합된 EV에 대한 비가역적 결합은 흡수 전후 다른 세포막에 비특이적 염료 부착 위험을 줄여줍니다.

싸토리우스 인큐사이트^® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 및 비부착성 세포의 혼합 배양에 대한 다양한 응용 프로그램을 가능하게 합니다. 부착성 및 비부착성 세포의 라벨 없는 세포 계수와 형태, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 한 후속 세포별 분류를 수행하여 혼합 배양 내 세부 집단의 동적 변화를 정량화하고, 새로운 발견의 세계를 열 수 있습니다.

카탈로그 번호 9600-0031

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인큐사이트® 라이브-셀 분석 시스템은 엑소좀과 EV를 연구하는 연구자들을 위한 강력한 도구입니다. 실시간 이미지 획득 및 분석 - EV 흡수 분석과 결합하여 - 세포의 동적 변화에 대한 통찰력을 제공합니다. EV 흡수 데이터를 세포 형태, 기능 및 건강 측정과 결합하면 단일 웰에서 다양한 처리 또는 배양 조건이 EV 흡수에 미치는 영향에 대한 귀중한 정보를 얻을 수 있습니다. 인큐사이트® 라이브-셀 분석 시스템, 통합 소프트웨어 및 인큐사이트® 엑소플루어 EV 라벨링 키트는 생세포 내 엑소좀과 EV 연구를 크게 지원할 수 있는 포괄적인 접근 방식을 제공합니다.

인큐사이트® 라이브-셀 분석 시스템 살펴보기

: A549 엑소좀(웰당 2 µg, 한사바이오메드)을 인큐사이트^® 엑소플루어 염료를 사용하여 표지했습니다. 표지된 엑소좀의 흡수는 다양한 세포 유형 및 배지 조건에서 시각화할 수 있습니다(상단 행). 각 조건의 염료만 대조군 웰은 형광 신호가 잔여 자유 염료로 인한 것이 아님을 보여줍니다(하단 행). A549 유래 엑소좀으로 처리 후 24시간에 촬영한 이미지는 대조군과 비교하여 세포 형태에 변화가 없음을 보여줍니다.

이미지는 A549 수용체 세포에 의한 Incucyte^® Exofluor Green으로 표지된 다양한 세포외소포(EV)의 흡수를 보여줍니다 (처리 후 24시간). A549 엑소좀은 한사바이오메드의 초여과 및 SEC 방법을 사용하여 추출되었으며 2 µg/well로 처리되었습니다. 인간 혈장 유래 엑소좀(Abcam, 초여과 추출 방법)은 4 µg/well의 농도로 사용되었습니다. MSC와 HEK293T EV(싸토리우스)는 TFF/IEX 크로마토그래피를 사용하여 추출되었으며, 각각 1.5 x 10⁸ 및 8.3 x 10⁷ 입자/well로 처리되었습니다.

키트에는 Incucyte^® 생세포 분석 시스템 내 이미징 전 무료 염료 제거를 위한 Vivaspin^® 컬럼과 멸균 및 응집물 제거를 위한 Minisart^® 필터가 포함되어 있습니다.

: EVs는 이온 교환 크로마토그래피(싸토리우스)를 사용하여 HEK293T 세포로부터 정제되었으며, Incucyte^® Exofluor Green EV 라벨링 키트를 사용하여 라벨링되어 A549 흡수 세포에 추가되었습니다. 위상 및 녹색 형광 이미지는 2일 동안 2시간마다 획득되었으며, Incucyte^® 세포별 소프트웨어를 사용하여 분석되었습니다. 라벨링된 EVs는 약 40배 희석(4.2 x 10⁸에서 1 x 10⁷ 입자/웰)되었으며, 평균 녹색 평균 강도를 사용하여 흡수가 평가되었습니다. 해당하는 농도 의존적 형광 변화가 관찰되었습니다. 위상 객체 수(t=0에 대해 정규화됨) 데이터는 테스트된 모든 EVs 농도에서 증식 변화가 없음을 보여줍니다.

: A549 세포를 밤새 배양한 후 엔도사이토시스 억제제인 다이나소어(0.01~100 µM)로 엑소좀이 없는 배양 배지에서 처리했습니다. 다이나소어 처리 직후, 인쿠사이트^® 엑소플루어 그린 염료(2 µg/well)로 표지된 한사 A549 엑소좀을 추가했습니다. 엑소좀 흡수의 농도 의존적 억제(IC₅₀ = 2.72 µM)는 녹색 형광의 강도에 반영되었습니다(24시간 데이터 표시).