종양 스페로이드 분석

그림 1. 조직 배양기 안에서 방해받지 않고 자라는 구형체의 크기를 시간에 따라 관찰하십시오.  

이미지는 Incucyte^® Nuclight Orange 2.0 렌티바이러스를 발현하는 U-87 MG 유방암 스페로이드의 명시야 및 공초점 형광 이미지를 보여줍니다. 세포독성 물질인 캄토테신(3µM)을 처리했을 때도 동일한 결과가 나타났습니다. Incucyte^® Cytotox Green 염료를 사용하여 스페로이드 내 세포 사멸을 정량화했습니다. 대조군(vehicle 처리) 스페로이드의 명시야 영역은 크기가 증가하는 반면, CMP 처리 스페로이드는 크기가 작게 유지됩니다. 명시야 영역의 정량화를 위해 8시간마다 자동으로 이미지를 촬영했습니다.

그림 2. 고화질 HD 위상차, 명시야 및 공초점 이미지를 통해 형태를 나타낸다.  

세포 배양 72시간 후 촬영한 고화질 HD 위상차, 명시야 및 공초점 형광 이미지는 Incucyte^® Nuclight Orange를 발현하는 A549, MCF-7 및 U87 MG 세포에서 형성된 스페로이드의 형태학적 차이를 보여줍니다. 다양한 세포 유형에서 느슨한 응집체와 조밀한 스페로이드 형태를 쉽게 구별할 수 있습니다. 모든 이미지는 10배 확대하여 촬영했습니다.

단일 배양 또는 공동 배양에서 시간에 따른 세포 변화를 밝히다

그림 3. 단일 스페로이드 적용 시 세포 건강에 미치는 영향을 시각화함.  

Incucyte^® Annexin V Green 염료를 사용하여 명시야 및 형광 판독값을 비교합니다. 공초점 이미지는 세포독성 화합물 처리 4일 후 A549 스페로이드의 마스크된 명시야 영역 내의 형광(Annexin V Green 및 Nuclight Orange)을 보여줍니다. 명시야 영역의 시간 경과 프로파일은 3배 희석 농도에서 약물에 대한 세포독성 반응을 나타내며, 약물 농도가 증가함에 따라 스페로이드 성장이 억제됨을 보여줍니다. 명시야 경계 내에서 측정된 평균 녹색 강도(하단 행)는 화합물에 대한 차별적인 반응을 보여줍니다.

그림 4. Incucyte^® CX3 생세포 분석 시스템을 사용하여 스페로이드 및 멀티플렉스 형광 시약을 지속적으로 모니터링합니다.  

Incucyte^® 세포주기 녹색/주황색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하는 U87 MG 스페로이드에 플루오로우라실(5-FU)과 시스플라틴을 처리했습니다. 공초점 현미경을 이용하여 Incucyte^® Annexin NIR 염료 존재 하에 96시간 동안 스페로이드를 관찰했습니다. 5-FU 처리 시 주황색 평균 형광 강도가 증가하여 G1기 세포 수가 증가했음을 나타냈습니다. 반면, 시스플라틴은 고농도에서 세포 사멸을 유도했으며, 이는 Annexin NIR 반응을 통해 확인되었습니다. 저농도에서는 시스플라틴 처리 초기 시점에서 녹색 평균 형광 강도가 일시적으로 증가하여 세포주기 역학의 변화를 시사했습니다.

재현 가능한 정량적 데이터 생성

그림 5. Incucyte^® 실험실에서 테스트 및 검증된 단일 종양 스페로이드 프로토콜은 따라하기 쉽습니다. 

3D 세포 배양 기술의 문제 해결에 소요되는 시간을 줄이고, 정량적 분석에 적합한 이미지를 얻기 위해 시행착오를 거칠 필요성을 없애십시오.

프로토콜을 다운로드하세요

그림 6. 스페로이드 성장 분석은 견고성과 재현성을 보여줍니다. 

Incucyte^® VesselView는 네 가지 세포 밀도에서 세 가지 유형의 구형체(폐암, 섬유육종, 난소암)의 마스크된 명시야 영역을 보여줍니다. 히스토그램은 이 시점에서 웰당 2,500개의 세포를 배양한 모든 세포 유형에 걸쳐 명시야 영역(μm²)의 분포 빈도를 비교합니다. 변동성 플롯 분석은 240시간 후 각 웰의 최대 명시야 객체 영역을 보여줍니다. 시간 경과 플롯은 세포 유형에 따른 최대 명시야 객체 영역(μm²)의 시간적 변화를 나타냅니다. 데이터는 240시간 동안 6시간 간격으로 수집되었으며, 모든 이미지는 10배 확대하여 촬영되었습니다.

그림 7. 생리학적으로 관련된 조건에서 견고한 약리학적 분석을 수행하십시오. 

캄토테신(CMP), 시스플라틴(CIS), 옥살리플라틴(OXA)이 SKOV-3 세포의 구형체 형성에 미치는 영향을 조직 배양기 내에서 표지 없이 측정하였다. SKOV-3 세포를 웰당 5,000개씩 접종하고 72시간 동안 구형체를 형성시켰다. 이후, 각 화합물을 단계적으로 희석하여 처리하고 구형체 성장 속도를 측정하였다. 마이크로플레이트 그래프는 시간에 따른 각 웰의 최대 명시야(BF) 면적(µm²)을 나타낸다. 농도 반응 곡선은 처리 후 204시간째의 최대 명시야 면적(µm²)을 나타낸다. 데이터는 240시간 동안 6시간 간격으로 수집하였다. 각 데이터 포인트는 평균 ± 표준오차(SEM), n=8을 나타낸다.

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자동화된 이미지 획득 및 분석 도구를 통해 '설정 후 그대로' 사용할 수 있는 환경을 제공합니다. 원격으로 이미지를 확인하여 실험 진행 상황을 모니터링하고 실시간으로 분석하여 신속한 의사 결정을 내릴 수 있습니다.