세포 동결 배지 및 염기성 용액

세포는 동결 과정에서 수분을 잃어 크기가 줄어들고, 최소 부피 이하로 떨어지면 빠르게 생존력을 상실합니다. 디메틸설폭사이드(DMSO)와 같은 동결보호제를 추가하면 이러한 영향을 완화할 수 있습니다.

완만한 냉동 과정 중 얼음 결정 형성을 방지하고 세포 생존성을 유지할 수 있는 수분 흡수제를 배지에 포함해야 합니다.

혈청은 냉동보존에 불필요하거나 냉동 및 해동 중 세포에 해로울 수 있는 성분들이 포함된 블랙박스입니다. 동물 성분 없는 용액은 생존율과 회복은 물론 재현성과 일관성 향상에 도움을 줍니다.

DMSO는 세포에 세포독성이 있습니다. 동결보존 과정에서 세포는 DMSO가 10% 이하로 희석된 용액에서만 보존될 수 있습니다.

동일한 효과를 가진 무독성 보호제가 있다면 DMSO 없이도 세포를 동결할 수 있습니다.

대부분의 세포 배양은 -130°C 이하의 온도에서 무기한은 아니더라도 수년간 보관할 수 있습니다. ATCC는 40년 이상 동결 보존된 배양에서 세포를 회복한 바 있습니다. 동결 보존의 장점은 장비 및 시약에 필요한 투자를 훨씬 상회합니다. 이러한 장점은 다음과 같습니다:

• 장비 고장이나 미생물 또는 다른 세포주에 의한 오염으로 배양을 잃는 것을 방지하기 위한 안전 재고 생성.
• 사용하지 않는 배양을 유지하는 데 필요한 시간, 에너지 및 재료 절약.
• 궁극적으로 노화될 유한한 세포 분열 능력을 가진 세포 보존.
• 유전적 불안정성 및/또는 선택적 압력에서 발생하는 표현형 변화 방지.
• 일련의 실험에 사용할 수 있는 표준 시약 제작 (출처: ATCC 동물 세포 배양 가이드).

1. 세포 펠릿을 얻기 위해 세포를 4 – 5분 동안 300 – 400 × g에서 원심분리하십시오. 그런 다음 무균적으로 상층액을 제거하십시오.
2. 2°C – 8°C의 동결보존 용액에 펠렛을 현탁시키세요. 철저히 혼합하고 현탁액을 크라이오바이알(예: 1.5 mL 크라이오바이알에 1.0 mL의 현탁액)로 옮기세요.
3. 세포를 점진적으로 동결(분당 1°C – 2°C)하려면 제어된 속도의 동결 시스템을 사용하고 바이알을 액체 질소(증기 상태)에 보관하세요. 또는 바이알을 동결 용기에 넣고 -80°C에 하룻밤 보관한 후 다음 날 크라이오바이알을 액체 질소의 증기 상태로 옮기는 것을 권장합니다.
4. 액체 질소에 24시간 보관 후 한 바이알을 해동하여 동결보존의 효율성을 확인하세요.