글리아 특성화

별아교세포, 미세아교세포, 희소돌기아교세포와 같은 교세포는 중추신경계(CNS)에서 항상성 유지, 시냅스 형성에 능동적 참여, 신경세포 보호 및 지원 등 여러 중요한 역할을 수행합니다. 최근 건강과 질병에서 교세포의 역할을 이해해야 할 필요성이 중요해졌으며, 교세포 중심적 관점에서 새로운 연구 도구와 접근법이 개발되고 있습니다. 이제 교세포 배양이 기초 및 중개 연구의 중요한 도구임이 인정되며, 원발 배양 또는 역분화 줄기세포를 사용하는 것이 인간 질병 연구에 더 적합한 것으로 간주됩니다. 그러나 모델은 주로 최종 형태학적 및 면역조직화학적 방법으로 제한됩니다. 교세포 연구는 교세포의 성장, 형태, 기능, 그리고 궁극적으로 중추신경계 질환에서의 역할에 대한 통찰력을 높이기 위한 기술적 도구와 중개 모델 개발을 통해 이점을 얻을 것입니다.

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백서: 생세포 분석을 통한 성상세포 모델 특성화

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운동학적, 고처리량 측정을 사용하여 서로 다른 뇌 영역의 동적 생물학적 변화 모니터링

피질, 해마 및 소뇌 별아교세포를 96-웰 플레이트에 2,000세포/웰로 파종했습니다. 증식과 형태를 10일 동안 모니터링했습니다. 이미지는 30-40% 밀집도(피질 2일 또는 해마 및 소뇌 4일)의 배양을 보여주며, 분지 형태학적 표현형을 정량화합니다(분홍색 및 갈색 마스크). 시간에 따른 프로필은 뇌 영역 간 성장을 비교하고 피질 별아교세포가 가장 빠른 성장률을 가짐을 보여줍니다. 별아교세포 분지는 시간에 따라 비교되며, 소뇌 별아교세포가 96시간에 가장 높은 분지(68.3 ± 1.8)를 보이고, 그 다음으로 해마(50.6 ± 1.5), 피질(12.3 ± 0.7) 순입니다. 각 웰의 최대 분지도 표시되었습니다(변동성 플롯). 데이터는 평균 ± 표준오차(24 반복)로 제시되었으며, 이미지는 10배 확대로 캡처되었습니다.

이오노마이신의 소뇌 별아교세포에 대한 약리학적 효과

소뇌 별아교세포를 96웰 플레이트에 10,000개/웰로 파종하고 세포 건강 시약 Incucyte^® Annexin V NIR(Sartorius; 0.5%)이 보충된 배지에서 칼슘 이오노포어 이오노마이신(0.01 – 10 µM)으로 처리했습니다. 증식과 세포 건강을 10일 동안 모니터링했습니다. 시간 경과 그래프는 세포 성장에 대한 이오노마이신의 동역학적 효과를 보여줍니다. 농도-반응 곡선은 세포 성장과 건강에 대한 이오노마이신의 효과를 비교하며, 농도 의존적인 밀집도 감소와 세포자멸사 증가가 관찰되어 이오노마이신의 독성 효과를 시사합니다. 대표 이미지는 24시간에서의 성장(위상) 및 세포 건강(NIR)에 대한 효과를 보여줍니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(3회 반복)로 제시되었으며, 이미지는 10배 확대로 캡처되었습니다.

비간섭성 시약을 사용하여 복잡한 조절을 풀어내기 위해 세포 주기 진행, 조절 및 세포 생존력 모니터링

Incucyte® 세포 주기 녹색|주황색 렌티바이러스를 발현하는 T98G 성상세포를 96웰 플레이트에 4,000개의 세포/웰로 파종했습니다. 세포를 세포 건강 시약 Incucyte® Annexin V NIR(0.5%; Sartorius)의 존재 하에 단백질 인산화효소 억제제 OKA(50 - 0.14 nM)로 처리하여 세포 주기 정지와 세포 생존력에 대한 효과를 모두 확인할 수 있도록 했습니다. 이미지는 Incucyte® 세포별 분석 모듈을 사용하여 10배율로 획득하여 세포를 개별적으로 분할할 수 있도록 했으며, 차량 및 OKA에 대한 대표적인 위상 및/또는 형광(녹색, 주황색, NIR) 위상 비디오를 처리 후 2일 동안 보여주었습니다. 시간 경과 곡선은 차량 또는 OKA에 대한 S|G2|M(녹색) 또는 G1(주황색) 세포 집단과 Annexin V 양성 세포(청록색) 집단을 보여주며, OKA(5.56 nM)가 16시간 내에 S|G2|M에서 정지를 유발했고 이는 약 36시간까지 안정적으로 유지되다가 세포 사멸 세포 수가 증가하기 시작했음을 나타냅니다. 농도-반응 곡선은 20시간에 OKA의 다른 단계 집단에 대한 빠른 효능과 48시간에 세포 생존력(Annexin V 양성)에 대한 지연된 효과를 나타냅니다. 데이터는 평균 ± 표준 오차, 6회 반복으로 제시되었습니다.

실시간 세포 이동 측정을 완전 자동화된 분석으로 실시간 평가 획득

원발성(대뇌 피질, 해마, 소뇌) 또는 iPSC(CDI, Fujifilm) 별아교세포를 Incucyte^® ImagelockT96-well 플레이트에 30,000세포/웰로 파종하고 Incucyte^® Woundmaker로 정밀하고 재현 가능한 상처를 만들었습니다. Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 이미지를 획득했습니다. 위상 비디오는 3일 동안 해마 배양의 상처 후 이동을 보여주며, 초기 긁힌 상처(파란색 마스크)와 상처 폐쇄 중(연한 노란색 마스크)의 분할을 보여주고 세포의 형태학적 평가를 허용합니다. 시간 경과 프로파일은 서로 다른 뇌 영역의 상처 폐쇄 속도를 비교하며, 소뇌 별아교세포가 가장 빠르게 이동합니다. 약리학적 연구의 경우, 대뇌 피질 별아교세포를 상처 내기 전에 이오노마이신(10 – 0.01 µM)과 함께 배양했으며, 농도 의존적 이동 억제가 관찰됩니다(IC50 = 1.67 µM). 데이터는 평균 ± 표준오차, 24 반복으로 제시됩니다.

실시간으로 글리아 주화성을 완전 자동화된 분석으로 정량화하다

T98G-WT 세포를 PDL (0.1 mg/mL)로 코팅된 Incuycte^® ClearView 96-웰 주화성 플레이트의 상부 챔버에 1,000세포/웰의 밀도로 배양했다. 세포가 부착된 후, 주화성 인자로 태아 소 혈청(FBS; 10 - 0.12%)을 하부 챔버에 추가했다. 이미지와 해당 마스크는 첨가 후 48시간의 멤브레인 상부와 하부를 대표한다. 48시간의 시간 경과 및 막대 차트는 FBS 수준 증가에 따른 농도 의존적 주화성 이동 증가를 나타낸다(EC50 = 3%). 데이터는 평균 ± 표준오차, 10회 반복으로 제시되었다.

주문 정보

제품	수량	카탈로그 번호
Incucyte^® 주화성 분석 소프트웨어 모듈	각	9600-001
Incucyte^® 클리어뷰 96-웰 주화성 플레이트	각	4582
Incucyte^® 스크래치 상처 세포 이동 소프트웨어 모듈	각	9600-0012
Incucyte^® 스크래치 상처 세포 이동 키트	각	4493
인큐사이트^® 스크래치 상처 세포 침범 액세서리	각	4444
인큐사이트^® 이미지락 96-웰 플레이트	각	4444
Incucyte^® 세포 주기 빨강/녹색 렌티바이러스 시약	1 바이알 (0.2 mL)	4779
Incucyte^® 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스 시약	1 바이알 (0.2 mL)	4809
Incucyte 세포별 분석 소프트웨어 모듈	1 모듈	9600-0031