싸토리우스 인큐사이트® 생세포 분석을 위한 세포 주기 분석
세포 주기는 세포 분열 동안 세포가 겪는 성장과 발달 단계의 연속입니다. 고유한 단계들로 구성된 세포 주기는 중요한 신약 발견 대상이며, 암 및 재생 의학 연구에 매우 중요합니다. 세포 주기의 비정상적 조절은 암의 특징이며, 세포 주기를 조절하는 체크포인트 억제제와 사이클린 의존성 키나아제는 항암 치료의 전략 또는 표적으로 연구됩니다. 세포 주기 조절은 재생 의학의 잠재력을 실현하는 데 필요한 세포 분화에서도 핵심 역할을 한다고 믿어집니다.
그러나 기존의 세포 주기 연구 방법에는 다음과 같은 어려움이 있을 수 있습니다:
생리학적으로 관련된 환경 내 배양기에서 마이크로플레이트 처리량으로 시간에 따른 연속적인 이미징 및 분석 - 이를 통해 세포 주기 동역학의 장기적이고 동적인 분석이 가능합니다. 생세포 내 세포 주기 진행을 정량화함으로써 연구자들은 다음과 같은 이점을 얻을 수 있습니다:
Incucyte® 세포 주기 분석 키트를 통해 이제 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기 진행을 지속적으로 정량화할 수 있습니다 - 배양기 내부에서 말이죠. 당사의 독특하고 접근성 높은 생세포 이미징 및 분석 접근법을 사용하여 치료 효과가 세포 주기 역학에 미치는 영향을 더 깊이 이해하거나, 세포 주기 정지를 형태학 및 기능과 연결할 수 있습니다.
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싸토리우스 세포 주기 분석은 96- 또는 384-웰 플레이트의 쉽게 배울 수 있는 자동화된 이미지 획득과 통합 분석을 간단하고 방해하지 않는 세포 주기 라벨링 프로토콜과 결합합니다. 그 결과는 배양기 내부에서 시간에 따른 세포 주기 진행의 동역학적이고 이미지 기반의 측정입니다. 싸토리우스 세포 주기 렌티바이러스 시약은 세포 주기 진행을 시각화할 수 있도록 간기 또는 유사분열기의 세포를 구분하기 위해 두 개의 형광 단백질의 균일한 발현을 제공하는 형광 유비퀴틴화 기반 세포 주기 지표(FUCCI)입니다. 싸토리우스 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스와 싸토리우스 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스는 모두 세포 주기 분석에 사용할 수 있습니다. 싸토리우스 세포별 분석 소프트웨어 모듈과 함께 사용하면, 세포 주기 분석은 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기의 각 단계 내 세포 하위 집단을 추적하여 세포 주기 역학에 대한 더 깊은 통찰력을 제공하는 강력한 솔루션을 제공합니다.
싸토리우스 세포 주기 렌티바이러스 시약은 세포 주기 진행 분석을 위해 생존 포유류 세포를 효율적이고 방해하지 않으며 균일하게 라벨링할 수 있게 합니다.
싸토리우스 인큐사이트® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 및 비부착성 세포의 혼합 배양에 대한 다양한 응용 프로그램을 가능하게 합니다. 부착성 및 비부착성 세포에 대해 레이블 없는 세포 계수를 수행하고, 이후 형태, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 세포별 분류를 통해 혼합 배양 내 세부 집단의 동적 변화를 정량화하여 새로운 발견의 세계를 열 수 있습니다.
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Incucyte® 생세포 분석 시스템은 연구자들에게 실시간 이미지 획득 및 분석을 제공하며 - Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약과 함께 - 동적인 세포 변화의 정량적 그림을 구축합니다. 세포 주기 데이터를 세포 형태, 기능 및 세포 건강 판독값과 결합하면 단일 웰에서 처리 또는 배양 조건의 여러 측면을 고려할 수 있습니다. 면역 세포와의 공동 배양과 같은 더 발전된 세포 모델도 Incucyte® 생세포 분석 시스템 및 시약을 통해 - 생리학적으로 관련된 조건에서 - 세포 주기 진행의 시간적 패턴에 대한 이해를 깊게 할 수 있습니다.
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여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기 진행을 지속적으로 모니터링하여 필요한 답변 얻기
아래 예시 데이터 참조
싸토리우스의 간단한 생세포 표지 프로토콜, 96웰 또는 384웰 플레이트에서 자동화된 획득 및 분석, 사용하기 쉬운 맞춤형 소프트웨어 도구로 실시간 세포 주기 변화 관찰
싸토리우스 Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈로 세부 집단 내 약물 처리가 세포 주기 단계에 미치는 영향 추적
다른 형광 시약과 다중화하여 더 많은 데이터 수집
다양한 세포 유형에서 이미지 기반 측정을 통해 여러 세포 분열에 걸친 세포 주기 진행을 추적하세요. 싸토리우스의 인큐베이터와 세포 건강 및 형태에 영향을 주지 않는 혁신적인 Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약을 통해 생리학적 관련성을 유지할 수 있습니다.
Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스로 형질전환된 HeLa 세포는 G1 단계에서 적색 형광, S/G2/M 단계에서 녹색 형광을 나타냅니다 (A). 노란색 세포는 G1에서 S로 전환 중이며, 비형광 세포는 M에서 G1로 이동 중입니다. Incucyte® 세포별 분석을 사용한 정량화는 노란색 마스크 (B)로 정확한 마스킹을 가능하게 하고 적색 및 녹색 형광을 기반으로 분류합니다 (C&D). E 패널은 세포 주기 기간의 정량화를 보여주며, Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스로 형질전환된 HeLa 세포를 티미딘(24시간 동안 2.5 mM)으로 처리하여 S/G2/M 단계에서 세포 성장을 정지시켰습니다. 이 차단을 해제하면 세포는 동기화된 분열을 진행합니다 (M-G1-S/G2/M). 데이터는 17시간의 주기 길이(피크 간 지속 시간)를 보여줍니다. 데이터는 6개 웰의 평균 ± 표준 오차로 표시됩니다.
Incucyte® 세포 주기 그린/레드 렌티바이러스를 세포에 안정적으로 도입하는 것은 세포에 영향을 주지 않습니다. 이미지는 부모 또는 형질전환된 MDA-MB-231 세포의 동일한 형태를 보여주며, 이미지 분석 결과 세포 성장에 아무런 영향이 없음을 보여줍니다.
싸토리우스의 접근 가능하고 종단간 솔루션으로 응답 시간을 단축하세요. 간단한 생세포 염색 프로토콜을 따르세요 - 고정 없음, 리프팅 없음. 사용하기 쉬운 전용 소프트웨어 도구로 96- 또는 384-웰 플레이트에서 획득 및 분석을 자동화하세요. Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 세포 주기 위상 분포의 동역학적 변화를 쉽게 그래프로 나타내세요.
간단한 염색 프로토콜을 사용하여 형광 유비퀴틴화 세포 주기 지표(FUCCI)를 안정적으로 발현하세요 - 고정 없음, 리프팅 없음.
Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스와 세포별 분석을 결합하여 개별적으로 식별된 세포 주기 단계를 추적하고, 약물 처리 효과를 평가하거나 약물 유도 세포 주기 정지와 세포 분화를 연결합니다.
싸토리우스 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스를 발현하는 HT1080 섬유육종 세포의 시간에 따른 세포 분열 과정. 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 이미지를 분석하고 녹색 및 적색 형광을 기반으로 세부 집단을 분류했습니다. 마이크로플레이트 뷰(상단 행)는 G1 단계(적색 집단), S/G2/M 단계(녹색 집단), G1-S 단계(주황색 집단)에 대해 30시간 동안 시스플라틴 및 5-FU의 농도 및 시간 의존적 효과를 차량 대비로 보여줍니다. 처리 후 24시간에 측정된 농도 반응 곡선(하단 행)은 시스플라틴 처리 후 G1 단계의 세포 집단이 감소하고, S/G2/M 단계는 증가하며, G-S 단계는 감소했음을 보여줍니다. 이는 유사분열을 방해하는 효과와 일치합니다. 5-FU 처리 후에는 G1 단계의 세포 집단이 증가하고, S/G2/M 및 G1-S 단계는 감소했으며, 이는 DNA 합성에 대한 효과와 일치합니다. 표시된 값은 6개 웰의 평균 ± 표준오차입니다.
THP-1 단핵구를 싸토리우스 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스로 안정적으로 발현시킨 후, 용매 또는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA; 100 nM)에 노출시키고 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 분석했습니다. PMA는 세포가 G1기에서 세포 주기를 정지시키며 분화를 유도합니다. 분석 결과, 용매 처리 세포와 비교하여 증식 부족, 적색 세포 비율 증가, G1기 증가 및 녹색 세포(S/G2/M기) 감소를 보여줍니다. PMA 처리 세포는 면적이 더 넓어 형태학적 변화를 나타내며, pHrodo 적색 세포 표지 키트로 표지된 자가포식 세포의 식세포 잠재력 증가와 일치합니다.
형광 세포 건강 시약으로 다중화하여 약물 스크리닝에서 더 많은 데이터 포인트와 발견을 수집하고 화합물 메커니즘에 대한 통찰력을 높이세요.
스캔은 Incucyte® SX5에서 획득되고 Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 분석되었습니다. 시간 경과 그래프는 S/G2/M(녹색) 또는 G1(빨간색) 세포 집단과 아넥신 V 양성 객체(청록색) 집단을 겹쳐서 보여줍니다. 카보플라틴은 세포를 S/G2/M에서 정지시킵니다. 라파티닙은 특정 세포 수용체를 표적으로 하므로 AU565에 효과적입니다. 캄프토테신은 세포 자멸을 유도합니다. 위상 및 형광(녹색, 주황색 NIR) 혼합 이미지는 치료 후 3일의 AU565 세포를 보여줍니다.
실시간 생세포 분석이 세포 생물학의 가능성과 워크플로우를 재정의하고 있습니다. 자세히 알아보기.
Incucyte® 세포 주기 그린/레드 렌티바이러스는 Incucyte® SX1 및 S3 생세포 분석 시스템과 호환됩니다. 또한 그린/레드 광학 모듈로 구성된 경우 Incucyte® SX5와도 호환됩니다.
Incucyte® 세포 주기 그린/오렌지 렌티바이러스는 그린/오렌지/NIR 광학 모듈로 구성된 경우 Incucyte® SX5와 호환됩니다.
그린/오렌지/NIR 광학 모듈과 호환되는 Incucyte® 세포 주기 그린/오렌지 렌티바이러스는 Incucyte® 아넥신 V NIR 또는 Incucyte® Cytotox NIR와 같은 근적외선 시약과 다중 검출하여 화합물 메커니즘에 대한 통찰력을 높일 수 있습니다.
예. 이 시약은 다양한 부착성 및 비부착성 세포 유형과 호환되며, 대부분의 세포에서 작동해야 합니다.
세포 유형과의 호환성은 다른 렌티바이러스 시약과 동일할 것이며, 대부분의 암/줄기 세포에서 작동해야 하지만 면역 세포에서는 작동하지 않을 수 있습니다.
네. 이 시약의 렌티바이러스 전달은 형질전환된 세포주에서 무제한 발현을 가능하게 합니다.
아니요. Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스의 세포 도입은 비교란성이며, 세포 형태나 성장에 변화가 없습니다.
싸토리우스 PI를 사용하면 다양한 세포 주기 단계를 식별할 수 있고 더 정확한 측정이 가능합니다. 하지만 이 방법은 사멸된 세포를 사용하며, Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스가 제공하는 동일 세포 내 장기 동역학 및 다중 세포 분열 연구 능력은 없습니다.
Incucyte® 세포별 소프트웨어는 하위 집단을 기반으로 4개 단계를 정확히 정량화할 수 있다는 장점이 있으며, 기본 분석기로는 3개 단계만 정량화할 수 있습니다(무색 집단 계산 불가). 세포별 분석은 증식을 평가하기 위해 레이블 없는 세포 수를 제공할 수 있는 반면, 기본 분석기는 총 영역 컨플루언스를 기반으로 증식을 분석합니다. 세포 형태를 평가하기 위해 세포별 분석은 개별 세포 영역/이심률 측정을 제공하며, 기본 분석기는 정성적 평가에 의존합니다. 마지막으로 세포별 분석은 간단하고 통합된 분석을 제공하는 반면, 기본 분석기는 추가 조작을 위해 데이터 내보내기가 필요합니다.
결론적으로, 세포별 분석이 더 강력하지만 세포별 분석과 기본 분석기 모두 세포 주기의 트렌드와 작용 메커니즘을 감지할 수 있습니다.
Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스는 세포 기능을 변경하지 않고 특정 세포 주기 단계에서 형광 단백질을 표적화하고 분해하기 위해 게미닌과 Cdt1 단백질을 사용하여 G1 단계를 S|G2|M 단계와 구분합니다.
이러한 시약은 게미닌-TagGFP2(녹색 형광 단백질)와 사용된 시약에 따라 Cdt1-TagRFP(주황색 형광 단백질) 또는 Cdt1-mKate2(적색 형광 단백질)를 모두 발현하는 단일 카세트 지표를 통합합니다.
따라서:
: 세포가 빨간색(Cdt1-TagRFP)이나 주황색(Cdt1-mKate2)으로 형광 발현
: 세포가 초록색(Geminin-TagGFP2)으로 형광 발현
: 세포는 무색입니다
: 세포는 노란색으로 나타납니다 (녹색과 빨간색/주황색의 조합)
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