신경종양학 개요

SH-SY5Y 신경모세포종 세포의 단일 배양을 96웰 플레이트(웰당 5,000개 세포)에 파종하고 3일 후 mTOR 억제제 PP242(50 – 0.21 µM)로 Incucyte^®Annexin V NIR(0.5%; Sartorius)이 포함된 배지에서 처리했습니다. 위상 및 형광 이미지를 Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 실시간으로 캡처했습니다. 대표적인 이미지는 72시간 후 PP242 처리(16.7 µM)와 용매를 비교하여 보여줍니다. 시간 경과 및 약물 반응 곡선은 위상 일치도의 농도 의존적 감소와 세포 사멸의 상응하는 증가를 보여줍니다. 데이터는 평균 ±표준오차(3반복)로 제시됩니다.

신경모세포종(SH-SY5Y)과 교모세포종(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 원형 바닥 플레이트에 독립적으로 접종(웰당 5,000개 세포)하고 단일 구상체를 형성하도록 허용했습니다(3일). 구상체 형성과 성장을 Incucyte에서 최대 10일 동안 모니터링했습니다. 형성 후 7일째의 대표적인 밝은 필드 이미지와 사용된 분할 마스크(파란색 윤곽)를 보여줍니다(A). 형성 후 시간 경과를 보면 구상체의 성장 속도와 면적이 다양했으며, SH-SY5Y가 U87에 비해 약간 더 큰 면적(각각 6.6 x 10⁵ µm² vs 5.0 x 10⁵ µm²)을 가졌습니다(B). 단일 구상체의 이심률 정량화 결과, U87 구상체는 형성 후 둥글고 조밀하며 낮은 이심률을 유지(1일차 0.33 vs 7일차 0.31)한 반면, SH-SY5Y 구상체는 더 높은 이심률 값을 보이며 증식에 따라 일부 조밀성 손실을 나타냅니다(1일차 0.55 vs 7일차 0.78). 데이터는 평균 ± 표준오차, 12회 반복 측정(C)으로 제시되었습니다.

U87-MG 세포를 Incucyte^® Nuclight-Orange로 안정적으로 발현시켜 96웰 ULA 플레이트에 다양한 밀도(1,000 - 7,500 세포/웰)로 파종하고 Incucyte^®에서 3일 동안 형성 과정을 모니터링했습니다 (A). 오렌지 형광 측정을 통해 파종의 높은 견고성과 밀도 의존적 구상체 면적 차이를 관찰했습니다 (B). 데이터는 평균 ± 표준오차로 제시되었으며 변동계수(CV%) 값이 표시되었습니다. 형성 후 단일 구상체(7,500 세포/웰, 3일)의 대표적인 밝은 시야 및 오렌지 형광 이미지와 사용된 오렌지 분할 마스크(빨간색 윤곽)를 보여줍니다 (C).

글리오블라스토마(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 원형 바닥 플레이트(웰당 5,000개 세포)에 파종하고 Incucyte에서 10일 동안 모니터링하면서 3일 동안 스페로이드를 형성하도록 했습니다. 형성 후, 스페로이드를 DNA 억제제 시스플라틴(0.82 – 200 µM) 또는 이중 mTOR 억제제 PP242(0.21 – 50 µM)로 Incucyte Annexin V NIR(A) 존재 하에 처리했습니다. 시간 경과 그래프는 용매와 비교한 시스플라틴(200 µM)과 PP242(50 µM)의 최고 농도에서 스페로이드 밝은 시야 영역의 변화를 보여줍니다(B). 시간 경과 데이터와 약물 반응 곡선은 PP242가 강한 세포 정지 효과를 보이며 높은 농도에서만 세포 자멸을 유발하는 반면, 시스플라틴은 더 높은 수준의 세포 독성을 나타냄을 제안합니다(C). 데이터는 평균 ± 표준 오차로 제시됩니다.

U87-MG 세포를 ULA 원형 바닥 96웰 플레이트(웰당 2,500개 세포)에 파종하고 구상체 형성을 허용했습니다(3일). 구상체를 연속 희석된 항전이 화합물로 처리하고 침습을 유도하기 위해 마트리젤(4.5 mg/mL)에 포매했습니다(최대 10일). Incucyte 마이크로플레이트 시야는 처리 후 3일에 구상체 침습에 대한 처리 효과를 보여줍니다(A). 사이토칼라신 D(2.34 nM – 300 nM)와 PP242(0.01 µM – 30 µM)는 농도 의존적으로 U87-MG 구상체 침습을 억제했으며, 블레비스타틴(0.01 µM – 30 µM)은 거의 영향을 미치지 않았습니다(B).