미세아교세포 특성 연구

• pH 감지 형광 프로브를 사용하여 이미지와 동영상으로 미세아교세포의 포식 작용 관찰
• 세포자멸 세포, 세포 잔해, 단백질 응집체 및 생물학적 입자의 포식에 적용 가능한 접근법

iPSC 유래 미크로글리아(Axol BioSciences)가 pHrodo^® 오렌지로 표지된 사멸성 Neuro2A 세포를 포식하는 시간경과 시각화. 이미지는 사멸성 표적 세포가 미크로글리아의 세포질로 진입함을 확인합니다. Neuro2A 표적 세포는 Incucyte^® 용 pHrodo^® 오렌지 세포 표지 키트로 표지되었으며, 스타우로스포린으로 사멸이 유도되었습니다.

• Incucyte^® 용 pHrodo^® 오렌지 세포 표지 염료에서 유발된 형광 신호의 자동화된 분할
• Neuro2A 세포 또는 pHrodo^® 오렌지 세포 표지 키트와 결합된 β 아밀로이드 응집체에 대한 식세포 작용의 실시간 분석
• 식세포 조절제의 작용 메커니즘 평가

pHrodo^® 표지된 사멸 신경세포(Neuro-2A)를 섭취하는 iPSC 유래 미세아교세포(Axol Bioscience)의 대표적인 형광 이미지. 표적 세포가 산성 식세포체로 내재화됨에 따라 세포 내 주황색 형광 증가가 관찰됨; 분할 마스크는 청록색 윤곽선으로 표시됨. pHrodo^® 표지된 Neuro2A 세포의 사멸세포 제거는 세포 수에 따라 달라짐. pHrodo^® 표지된 Aβ 응집체의 식세포 작용은 시간과 농도에 의존적임

. BV-2 효과 세포가 사멸하는 Neuro2A 세포(왼쪽 패널) 또는 E. coli 생물 입자(중간 패널)를 탐식합니다. 시토칼라신 D(상단 패널)는 탐식세포 작용과 식균 작용 모두를 농도 의존적으로 억제하여, 각각 0.16 µM과 1.5 µM의 IC 값을 산출합니다. 대조적으로, aVb3 및 aVb5 인테그린 억제제인 실렌기티드는 선택적으로 탐식세포 작용(IC 값 0.17 µM)을 감소시키면서, 테스트된 최고 농도(100 µM)에서 식균 작용에는 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않습니다. 이러한 데이터는 탐식세포 작용에 필요한 세포 상호작용에서 인테그린의 역할을 뒷받침하지만, 박테리아 식균 작용에서는 그렇지 않음을 지지합니다.

• 이미지와 동영상으로 미세아교세포 주화성 관찰
• 희귀하고 고가의 1차 세포 집단의 낮은 세포 사용에 이상적인 Incucyte^® Clearview 96-웰 주화성 플레이트당 1000~5000개의 세포만 사용

Incucyte^® Clearview 플레이트의 iPSC 유래 미세아교세포(CDI) 이미지. 구멍은 파란색으로 표시됨(왼쪽). 미세아교세포는 보체 성분 5a(C5a)를 향해 시간 및 농도 의존적으로 이동함

• 단핵구에서 미세아교세포로의 분화 중 형태 변화 추적

. 미세아교세포의 다양한 외관을 참고하십시오. 12일 후, 빨간색 화살표는 가지 모양의 세포를, 노란색 화살표는 더 큰 편평한 아메바 모양의 세포를 강조합니다. 세포는 14일 동안 2일마다 분화 배지로 공급되었으며, 위상 이미지는 6시간마다 20배 확대로 획득되었습니다.

• 신경염증성 미세아교세포 모델에서 비방해적 Incucyte^® 키나아제 Akt 녹색/적색 렌티바이러스를 사용하여 Akt 활성의 실시간 변화 평가

HMC3 미세아교세포는 Incucyte^® 키나아제 녹색/적색 렌티바이러스로 표지되었으며, 이는 인산화에 따라 세포 내 위치가 달라지는 유전적으로 인코딩된 형광 키나아제 전위 보고자입니다. 96웰 플레이트에 파종된 세포는 Akt(MK2206)를 표적으로 하는 억제제와 상위 PI3K(LY294002 및 Wortmannin) 및 하위 mTOR(PP242)로 처리되었습니다. HD 위상차 및 형광 이미지는 Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 획득되었으며, Akt 활성의 지표인 핵 전위 비율(NTR)이 통합 소프트웨어를 사용하여 정량화되었습니다.

플레이트 뷰는 24시간 동안의 NTR 반응을 보여주며, 4가지 화합물 모두 NTR의 감소로 나타나는 농도 의존적 Akt 활성 억제를 보여줍니다. PI3K 억제제 LY294002와 Wortmannin은 기저 Akt 활성 수준으로 회복되는 빠른 억제를 보였으며, 동시에 알로스테릭 Akt 억제제 MK2206과 mTOR 억제제 PP242는 Akt 활성을 지속적으로 감소시킵니다. 처리 후 6시간의 NTR 농도-반응 곡선으로 변환된 데이터는 MK2206이 가장 강력한 효과를 가짐을 나타냅니다. 녹색 형광 채널 이미지는 미처리(vehicle) 세포에서 형광이 세포질과 핵에 걸쳐 분포되어 있지만, MK2206 처리된 세포는 핵에 뚜렷한 국소화를 보여 Akt 억제를 나타냅니다.