세포주기 분석

세포주기는 세포 분열 과정에서 세포가 거치는 일련의 성장 및 발달 단계입니다. 여러 단계로 구성된 세포주기는 신약 개발의 핵심 표적이며, 암 및 재생 의학 연구에 매우 중요한 의미를 지닙니다. 세포주기 조절 이상은 암의 특징이며, 세포주기를 조절하는 체크포인트 억제제와 사이클린 의존성 키나아제는 항암 치료 전략 또는 표적으로 연구되고 있습니다. 또한, 세포주기 조절은 재생 의학의 가능성을 실현하는 데 필요한 세포 분화 과정에서도 중요한 역할을 하는 것으로 여겨집니다.

하지만 기존의 세포 주기 연구 방법은 다음과 같은 이유로 어려울 수 있습니다.

  • 소수의 세포 또는 실험 도중 고정되거나 소모된 세포로부터 단일 시점의 데이터만 추출하거나 여러 시점의 데이터를 연결할 수 있는 기능
  • 동일한 세포 내에서 여러 번의 세포 분열에 걸쳐 세포 주기를 연구할 수 없음
  • 세포 주기 표지, 데이터 수집 및 분석을 위한 독립적이고 통합되지 않은 솔루션들의 조합
  • 세포주기 단계 평가를 위한 복합 데이터 분석
  • 기기 처리량 부족으로 인해 연구 대상 변수 또는 화합물 수에 제한이 있음

배양기 내부의 생리적으로 적합한 환경에서 마이크로플레이트 처리량으로 시간에 따른 연속적인 이미징 및 분석을 통해 세포 주기 역학의 장기적인 동역학 분석이 가능합니다. 살아있는 세포 내 세포 주기 진행을 정량화함으로써 연구자들은 다음과 같은 작업을 수행할 수 있습니다.

  • 시간에 따른 세포 주기 역학을 지속적으로 연구합니다.
  • 개별 세포에서 세포 주기의 각 단계를 개별적으로 추적합니다.
  • 생리학적으로 의미 있는 맥락에서 세포 주기 진행 과정을 밝히다
  • 약물이 세포 주기 조절에 미치는 영향에 대해 더 깊이 이해하십시오.

Incucyte® 세포 주기 분석 키트를 사용하면 배양기 안에서 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기 진행을 지속적으로 정량화할 수 있습니다. 독창적이고 간편한 생세포 이미징 및 분석 방식을 통해 치료 효과가 세포 주기 역학에 미치는 영향을 심층적으로 파악하거나, 세포 주기 정지와 형태 및 기능 간의 연관성을 밝혀낼 수 있습니다.

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세포 주기 솔루션

Incucyte® 세포 주기 분석 개요

Incucyte® 세포주기 분석 키트는 배우기 쉬운 자동 이미지 획득 및 96웰 또는 384웰 플레이트의 통합 분석 기능을 세포주기 표지를 위한 간단하고 비침습적인 프로토콜과 결합합니다. 그 결과, 배양기 안에서 시간에 따른 세포주기 진행을 역동적이고 이미지 기반으로 측정할 수 있습니다. Incucyte® 세포주기 렌티바이러스 시약은 형광 유비퀴틴화 기반 세포주기 지표(FUCCI)로서, 두 가지 형광 단백질을 균일하게 발현하여 간기 또는 분열기 세포를 구분하고 세포주기 진행을 시각화할 수 있도록 합니다. Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스와 Incucyte® 세포주기 녹색/주황색 렌티바이러스 모두 세포주기 분석 키트에 사용 가능합니다. Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈과 함께 사용되는 세포 주기 분석은 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기의 각 단계 내 세포 하위 집단을 추적하는 강력한 솔루션을 제공하여 세포 주기 역학에 대한 더 깊은 통찰력을 제공합니다.

Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약은 살아있는 포유류 세포를 효율적이고, 세포에 영향을 주지 않으며, 균일하게 표지하여 세포 주기 진행을 분석할 수 있도록 합니다.

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Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈

Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 세포와 비부착성 세포가 혼합된 배양 환경에 다양한 응용 프로그램을 제공합니다. 부착성 세포와 비부착성 세포에 대한 라벨 없는 세포 계수를 수행하고, 모양, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 세포별 분류를 통해 혼합 배양 내 하위 집단의 동적 변화를 정량화하여 새로운 발견의 세계를 열어줍니다.

제품 번호: 9600-0031

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Incucyte® SX5 Live-Cell Analysis System

Incucyte® 생세포 분석 시스템을 이용한 세포 주기 분석

Incucyte® 생세포 분석 시스템은 연구원들에게 실시간 이미지 획득 및 분석 기능을 제공하며, Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약과 함께 동적인 세포 변화에 대한 정량적 정보를 구축할 수 있도록 합니다. 세포 주기 데이터와 세포 형태, 기능, 세포 건강 상태 데이터를 결합함으로써 단일 배양웰에서 처리 또는 배양 조건의 다양한 측면을 고려할 수 있습니다. 면역 세포와의 공동 배양과 같은 더욱 발전된 세포 모델 또한 생리학적으로 적합한 조건에서 Incucyte® 생세포 분석 시스템 및 시약에서 얻은 정보를 활용하여 세포 주기 진행의 시간적 패턴에 대한 이해를 심화할 수 있습니다.

Incucyte® 생세포 분석 시스템을 살펴보세요.

Incucyte® 세포주기 분석의 주요 장점

Visualization of Synchronized Division of A549 And Cells Stably Expressing Incucyte® Cell Cycle Lentivirus Reagent.
Visualization of Synchronized Division of A549 And Cells Stably Expressing Incucyte® Cell Cycle Lentivirus Reagent.
Incucyte® Cell Cycle Green/Orange Lentivirus Reagent (EF1α-Puro) Quick Start Guide
세포 주기 역학을 정량화합니다

세포 분열 과정을 여러 번에 걸쳐 지속적으로 관찰하여 필요한 답을 얻으세요.


아래 예시 데이터를 참조하세요.
   

생산성을 극대화하세요

간단한 생세포 표지 프로토콜, 자동화된 데이터 수집 및 분석 기능을 갖춘 96웰 또는 384웰 플레이트와 사용하기 쉬운 전용 소프트웨어 도구를 통해 실시간으로 세포 주기 변화를 관찰할 수 있습니다.

새로운 통찰력을 얻으세요

Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 세포 하위 집단 내 세포 주기 단계에 대한 약물 치료 효과를 추적하십시오.

더 심층적인 생물학적 통찰력을 얻으세요

다른 형광 시약과 함께 다중화하여 더 많은 데이터를 수집하십시오.

세포 주기 분석을 위한 예시 데이터

세포 주기 역학을 정량화합니다

이미지 기반 측정을 사용하여 다양한 세포 유형에서 여러 세포 분열에 걸친 세포 주기 진행 과정을 추적하십시오. 배양기가 제공하는 안정적인 배양 환경과 세포 건강 및 형태에 영향을 주지 않는 당사의 혁신적인 Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약을 통해 생리학적 적합성을 유지하십시오.

Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스를 형질전환시킨 HeLa 세포는 G1기에서 적색 형광을, S/G2/M기에서 녹색 형광을 나타냅니다(A). 노란색 세포는 G1기에서 S기로 전환 중인 세포이고, 형광이 없는 세포는 M기에서 G1기로 이동 중인 세포입니다. Incucyte® 세포별 분석을 이용한 정량화는 노란색 마스크(B)로 표시된 것처럼 정확한 마스킹을 가능하게 하고, 적색 및 녹색 형광을 기반으로 세포 분류를 수행할 수 있게 합니다(C&D). 패널 E는 세포주기 지속 시간을 정량화한 결과를 보여줍니다. Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스를 형질전환시킨 HeLa 세포에 티미딘(2.5 mM, 24시간)을 처리하여 S/G2/M기에서 세포 성장을 억제했습니다. 이 억제가 해제되면 세포는 동시 분열(M-G1-S/G2/M)을 합니다. 데이터는 세포주기 지속 시간이 17시간(피크 간 지속 시간)임을 보여줍니다. 데이터는 6개 웰의 평균 ± 표준오차로 표시됩니다.

Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스를 세포에 안정적으로 도입하는 것은 세포에 아무런 영향을 미치지 않습니다. 이미지를 통해 모세포와 형질전환된 MDA-MB-231 세포에서 동일한 형태가 관찰되었으며, 이미지 분석 결과 세포 성장에 대한 영향은 없는 것으로 나타났습니다.

생산성을 극대화하세요

Incucyte의 간편한 엔드투엔드 솔루션으로 분석 시간을 단축하세요. 간단한 생세포 표지 프로토콜을 따르면 고정이나 세포 분리 과정이 필요 없습니다. 사용하기 쉬운 전용 소프트웨어 도구를 사용하여 96웰 또는 384웰 플레이트에서 데이터 수집 및 분석을 자동화할 수 있습니다. Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하면 세포 주기 단계 분포의 동적 변화를 보여주는 그래프를 손쉽게 생성할 수 있습니다.

고정이나 리프팅 과정 없이 간단한 라벨링 프로토콜을 사용하여 형광 유비퀴틴화 세포 주기 지표(FUCCI)를 안정적으로 발현시키세요.

새로운 통찰력을 얻으세요

Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스를 세포별 분석과 결합하여 약물 치료 효과 평가를 위해 세포 주기의 개별 단계를 추적하거나 약물 유도 세포 주기 정지를 세포 분화와 연관시킬 수 있습니다.

시스플라틴 또는 플루오로우라실(5FU) 처리 후 HT1080 섬유육종 세포 분열의 시간 경과. 세포 주기 단계는 Incucyte® Cell Cycle Green/Red 렌티바이러스를 발현하는 HT1080 세포에서 측정하였다. 이미지는 Cell-by-Cell Analysis Software를 사용하여 분석하였고, 세포 집단은 녹색 및 적색 형광을 기준으로 분류하였다. 마이크로플레이트 이미지(상단 행)는 G1기(적색 세포), S/G2/M기(녹색 세포) 및 G1-S기(주황색 세포)에서 시스플라틴과 5FU의 농도 및 시간 의존적 효과를 대조군과 비교하여 30시간 동안 나타낸 것이다. 처리 후 24시간째의 농도 반응 곡선(하단 행)은 시스플라틴 처리 후 G1기 세포 집단의 감소, S/G2/M기 세포 집단의 증가, G1-S기 세포 집단의 감소를 보여주며, 이는 시스플라틴이 유사분열을 억제하는 효과와 일치한다. 5FU 처리 후, DNA 합성 억제 효과에 따라 G1기 세포 비율이 증가하고 S/G2/M기 및 G1-S기 세포 비율은 감소했습니다. 제시된 값은 6개 웰의 평균 ± 표준오차입니다.

Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하는 THP-1 단핵구를 대조군(vehicle) 또는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA; 100 nM)에 노출시킨 후, 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. PMA는 세포주기를 G1기에 정지시켜 세포 분화를 유도한다. 분석 결과, 대조군에 비해 PMA 처리 세포에서는 세포 증식이 억제되고, 적색 세포(G1기) 비율이 증가하며, 녹색 세포(S/G2/M기) 비율이 감소하였다. 또한, PMA 처리 세포는 면적이 증가하여 형태학적 변화를 나타냈으며, pHrodo® Incucyte® 적색 세포 표지 키트로 표지된 Jurkat 세포의 식세포작용을 통해 확인된 바와 같이 식세포 작용 능력도 증가하였다.

더 심층적인 생물학적 통찰력을 얻으세요

형광 세포 건강 시약을 이용한 다중 분석을 통해 약물 스크리닝에서 더 많은 데이터 포인트와 결과를 수집하여 화합물의 작용 메커니즘에 대한 통찰력을 얻으십시오.

Incucyte® SX5의 Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 스캔을 획득하고 분석했습니다. 시간 경과에 따른 세포 집단은 S/G2/M기(녹색) 또는 G1기(빨간색)에 있으며, Annexin V 양성 세포 집단(청록색)이 중첩되어 나타납니다. 카보플라틴은 세포를 S/G2/M기에 정지시킵니다. 라파티닙은 특정 세포 수용체를 표적으로 하므로 AU565 세포에 효과적입니다. 캄토테신은 세포 사멸을 유도합니다. 위상차 및 형광(녹색, 주황색 근적외선) 혼합 이미지는 치료 후 3일째의 AU565 세포를 보여줍니다.

세포주기 분석 기술 자료

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생세포 분석 7판 핸드북

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애플리케이션 노트

세포 형태 하위 집단의 고급 무표지 분류

제품 리소스

생세포 모델에서 세포주기 단계의 실시간 정량화

PDF | 2.2MB

Incucyte® 세포주기 녹색/주황색 2.0 시약(EF1α, Puro)

PDF | 925.6KB

Incucyte® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스 2.0 시약(EF1α, Puro)

PDF | 904.0KB
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브로셔

Incucyte® — 시약, 소모품 및 소프트웨어

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세포 주기 관련 자주 묻는 질문

Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스는 Incucyte® SX1 및 S3 생세포 분석 시스템과 호환됩니다. 또한 녹색/적색 광학 모듈을 장착하면 Incucyte® SX5 시스템과도 호환됩니다.

Incucyte® 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스는 녹색/주황색/NIR 광학 모듈과 함께 구성될 경우 Incucyte® SX5와 호환됩니다.


그린/오렌지/NIR 광학 모듈과 호환되는 Incucyte® 세포 주기 그린/오렌지 렌티바이러스는 Incucyte® Annexin V NIR 또는 Incucyte® Cytotox NIR과 같은 근적외선 시약과 함께 사용하여 화합물 메커니즘에 대한 추가적인 통찰력을 얻을 수 있습니다.


예. 이 시약은 다양한 부착성 및 비부착성 세포 유형과 호환되며 대부분의 세포에서 효과가 있을 것입니다.

세포 유형과의 호환성은 다른 렌티바이러스 시약과 동일하며 대부분의 암세포/줄기세포에 효과가 있을 것으로 예상되지만 면역세포에는 효과가 없을 수도 있습니다.


예. 이 시약을 렌티바이러스로 전달하면 형질전환된 세포주에서 무제한 발현이 가능합니다.


아니요. Incucyte® 세포주기 렌티바이러스를 세포에 도입하는 것은 세포에 아무런 영향을 미치지 않으며, 세포 형태나 성장에 변화가 관찰되지 않습니다.


PI를 사용하면 다양한 세포 주기 단계를 식별하고 더 정확한 측정값을 얻을 수 있습니다. 그러나 이 방법은 사멸한 세포를 사용하기 때문에 장기적인 동역학 연구나 Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스가 제공하는 동일 세포 내 여러 번의 세포 분열 연구 기능이 없습니다.


Incucyte® Cell-by-Cell 소프트웨어는 하위 집단을 기반으로 4단계 모두를 정확하게 정량화할 수 있다는 장점이 있습니다. 반면 Basic Analyzer는 3단계만 정량화할 수 있으며(무색 세포 집단은 계산할 수 없음), Cell-by-Cell은 세포 증식을 평가하기 위한 라벨 없는 세포 계수를 제공하는 반면 Basic Analyzer는 전체 면적 밀도를 기준으로 증식을 평가합니다. 세포 형태 평가의 경우, Cell-by-Cell은 개별 세포의 면적/편심률 측정값을 제공하는 반면 Basic Analyzer는 정성적 평가에 의존합니다. 마지막으로, Cell-by-Cell은 사용하기 쉬운 통합 분석 기능을 제공하는 반면 Basic Analyzer는 추가적인 데이터 처리를 위해 데이터를 내보내야 합니다.

결론적으로, 세포별 분석이 더 강력하긴 하지만, 세포별 분석과 기본 분석기 모두 세포 주기의 경향과 작용 메커니즘을 감지할 수 있습니다.


Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스는 Geminin 및 Cdt1 단백질을 사용하여 세포 기능을 변경하지 않고 특정 세포 주기 단계에서 형광 단백질을 표적화하고 분해함으로써 G1기와 S|G2|M기를 구분합니다.

이 시약들은 Geminin-TagGFP2(녹색 형광 단백질)와 Cdt1-TagRFP(주황색 형광 단백질) 또는 Cdt1-mKate2(적색 형광 단백질)를 모두 발현하는 단일 카세트 지표를 포함합니다.

그러므로:

세포는 붉은색(Cdt1-TagRFP) 또는 주황색(Cdt1-mKate2) 형광을 띕니다.

세포는 녹색 형광을 띕니다 (Geminin-TagGFP2).

세포는 무색입니다.

세포가 노란색(녹색과 빨간색/주황색의 조합)으로 보입니다.