세포 주기 분석

세포 주기는 세포 분열 동안 세포가 거치는 성장 및 발달 단계의 연속입니다. 고유한 단계들로 구성된 세포 주기는 중요한 신약 발견 대상이며, 암 및 재생 의학 연구에서 매우 중요합니다. 세포 주기의 비정상적 조절은 암의 특징적 징후이며, 세포 주기를 조절하는 체크포인트 억제제 및 사이클린 의존성 키나아제는 항암 치료의 전략 또는 표적으로 연구됩니다. 세포 주기 조절은 재생 의학의 잠재력을 실현하는 데 필요한 세포 분화에서도 핵심 역할을 한다고 믿어집니다.

그러나 기존의 세포 주기 연구 방법은 다음과 같은 이유로 어려울 수 있습니다:

  • 실험 중에 고정되거나 소진된 소수의 세포로부터 단일 시점 또는 연결된 시점만을 취할 수 있는 능력
  • 동일한 세포 내에서 여러 세포 분열에 걸친 세포 주기를 연구할 수 없는 한계
  • 세포 주기 라벨링, 데이터 수집 및 분석을 위한 독립적이고 통합되지 않은 솔루션의 조합
  • 세포 주기 단계 평가를 위한 복잡한 데이터 분석
  • 기기 처리량 부족으로 인한 변수 또는 연구 대상 화합물 수의 제한

배양기 내부의 생리학적으로 관련된 환경에서 마이크로플레이트 처리량으로 시간에 따른 연속 이미징 및 분석 - 세포 주기 동역학의 장기적이고 동적인 분석을 가능하게 합니다. 생세포 내 세포 주기 진행을 정량화함으로써, 연구자들은 다음을 수행할 수 있습니다:

  • 시간에 따른 세포 주기 동역학을 연속적으로 연구
  • 개별 세포에서 세포 주기의 개별적으로 식별된 단계 추적
  • 생리학적으로 관련성 있는 맥락 내에서 세포 주기 진행 과정 밝히기
  • 세포 주기 조절에 대한 약물 유도 효과에 대한 심층 통찰 얻기

Incucyte® 세포 주기 분석을 통해 이제 배양기 내에서 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기 진행을 지속적으로 정량화할 수 있습니다. 세포 주기 동역학에 대한 치료 효과를 더 깊이 이해하거나, 라이브 세포 이미징 및 분석의 고유하고 접근 가능한 방법을 사용하여 세포 주기 정지를 형태 및 기능과 연결할 수 있습니다.

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세포 주기 솔루션

Incucyte® 세포 주기 분석 개요

Incucyte® 세포 주기 분석은 96 또는 384웰 플레이트의 쉽게 배울 수 있는 자동 이미지 획득과 통합 분석을 간단하고 방해하지 않는 세포 주기 표지 프로토콜과 결합합니다. 그 결과는 배양기 내부에서 시간에 따른 세포 주기 진행의 동역학적이고 이미지 기반의 측정입니다. Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약은 형광 유비퀴틴화 기반 세포 주기 표시자(FUCCI)로, 세포 주기 진행을 시각화할 수 있도록 간기 또는 유사분열기의 세포를 구분하는 두 가지 형광 단백질의 균일한 발현을 제공합니다. Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스와 Incucyte® 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스는 모두 세포 주기 분석에 사용할 수 있습니다. Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈과 함께 사용하면, 세포 주기 분석은 여러 세포 분열에 걸쳐 세포 주기의 각 단계 내 세포 하위 집단을 추적하여 세포 주기 동역학에 대한 더 깊은 통찰력을 제공하는 강력한 솔루션을 제공합니다.

Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약은 포유류 세포의 세포 주기 진행을 분석하기 위한 효율적이고 비교란적이며 균일한 생세포 표지를 가능하게 합니다.

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인쿠사이트® 세포별 분석 소프트웨어 모듈

인쿠사이트® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 부착성 및 비부착성 세포의 혼합 배양에 대한 다양한 응용 프로그램을 가능하게 합니다. 부착성 및 비부착성 세포의 라벨 없는 세포 계수를 수행하고, 이후 형태, 크기 또는 형광 강도를 기반으로 세포별 분류를 통해 혼합 배양 내 세부 집단의 동적 변화를 정량화하여 새로운 발견의 세계를 열 수 있습니다.

제품 번호 9600-0031

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Incucyte® SX5 Live-Cell Analysis System

Incucyte® 생세포 분석 시스템을 이용한 세포 주기 분석

Incucyte® 실시간 세포 분석 시스템은 연구자들에게 실시간 이미지 획득 및 분석을 제공하며 - Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스 시약과 함께 - 동적인 세포 변화의 정량적인 그림을 구축합니다. 세포 주기 데이터를 세포 형태, 기능 및 세포 건강 판독값과 결합하면 단일 웰에서 처리 또는 배양 조건의 여러 측면을 고려할 수 있습니다. 면역 세포와의 공동 배양과 같은 더 고급 세포 모델도 Incucyte® 실시간 세포 분석 시스템 및 시약을 통해 - 생리학적으로 관련된 조건에서 - 세포 주기 진행의 시간적 패턴에 대한 이해를 깊게 할 수 있습니다.

Incucyte® 실시간 세포 분석 시스템 탐색

Incucyte® 세포 주기 분석의 주요 장점

Visualization of Synchronized Division of A549 And Cells Stably Expressing Incucyte® Cell Cycle Lentivirus Reagent.
Visualization of Synchronized Division of A549 And Cells Stably Expressing Incucyte® Cell Cycle Lentivirus Reagent.
Incucyte®️ Cell Cycle Green/Orange Lentivirus Reagent (EF1α-Puro) Quick Start Guide
세포 주기 동태 정량화

여러 세포 분열에 걸쳐 지속적으로 세포 주기 진행을 모니터링하여 필요한 답변 얻기


아래 예시 데이터 참조
   

생산성 향상

96 또는 384 웰 플레이트에서 사용하기 쉬운 전용 소프트웨어 도구를 통해 실시간 세포 주기 변화를 보여주는 간단한 생세포 표지 프로토콜, 자동화된 획득 및 분석

새로운 통찰력 얻기

Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 통해 하위 집단 내 약물 처리가 세포 주기 단계에 미치는 영향 추적

더 깊은 생물학적 통찰력 도출

다른 형광 시약과 다중화하여 더 많은 데이터 수집

세포 주기 분석을 위한 예시 데이터

세포 주기 동태 정량화

이미지 기반 측정을 통해 다양한 세포 유형에서 여러 세포 분열에 걸친 세포 주기 진행을 추적하세요. 인큐베이터에서 제공되는 안정적인 배양과 세포의 건강과 형태에 영향을 주지 않는 당사의 혁신적인 Incucyte 세포 주기 렌티바이러스 시약을 통해 생리학적 관련성을 유지하세요.

Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스로 형질전환된 HeLa 세포는 G1에서 적색 형광, S/G2/M에서 녹색 형광을 나타냅니다 (A). 노란색 세포는 G1에서 S로 전환 중이며, 비형광 세포는 M에서 G1로 이동 중입니다. Incucyte® 세포별 분석을 사용한 정량화는 노란색 마스크(B)로 정확한 마스킹을 가능하게 하고 적색 및 녹색 형광을 기반으로 분류합니다 (C&D). E 패널은 세포 주기 지속 시간의 정량화를 보여주며, Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스로 형질전환된 HeLa 세포를 티미딘(2.5 mM, 24시간)으로 처리하여 S/G2/M 단계에서 세포 성장을 정지시켰습니다. 이 차단을 해제하면 세포는 동기화된 분열(M-G1-S/G2/M)을 수행합니다. 데이터는 17시간의 주기 길이(피크 간 지속 시간)를 보여줍니다. 데이터는 6개 웰의 평균 ± 표준 오차로 표시됩니다.

Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스를 세포에 안정적으로 도입하는 것은 교란되지 않습니다. 이미지는 모세포 또는 형질전환된 MDA-MB-231 세포에서 동일한 형태를 보여주며, 이미지 분석은 세포 성장에 영향이 없음을 보여줍니다.

생산성 향상

Incucyte의 접근 가능한 엔드투엔드 솔루션으로 답변 시간 단축. 간단한 생세포 표지 프로토콜 따라 - 고정 없음, 들어올림 없음. 사용하기 쉬운 전용 소프트웨어 도구로 96- 또는 384-웰 플레이트에서 획득 및 분석 자동화. Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 세포 주기 위상 분포의 동역학적 변화를 보여주는 그래프를 쉽게 생성.

간단한 표지 프로토콜을 통해 형광 유비퀴틴화 세포 주기 표지자(FUCCI) 안정적으로 발현 - 고정 없음, 들어올림 없음

새로운 통찰력 얻기

Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스를 세포별 분석과 결합하여 개별적으로 식별된 세포 주기 단계를 추적하고 약물 처리 효과를 평가하거나, 약물 유도 세포 주기 정지를 세포 분화와 연결합니다.

시스플라틴 또는 플루오로우라실(5FU) 처리 후 HT1080 섬유육종 세포 분열의 시간 경과. 세포 주기 단계는 Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스를 발현하는 HT1080 세포에서 결정되었습니다. 이미지는 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 분석되었으며, 녹색 및 적색 형광을 기반으로 인구 하위 집합을 분류했습니다. 마이크로플레이트 보기(상단 행)는 30시간 동안 시스플라틴과 5FU의 농도 및 시간 의존적 효과를 차량과 비교하여 G1 단계(적색 인구), S/G2/M 단계(녹색 인구) 및 G1-S 단계(주황색 인구)를 보여줍니다. 처리 후 24시간에 측정된 농도 반응 곡선(하단 행)은 시스플라틴 처리 후 G1 단계의 세포 인구가 감소하고, S/G2/M 단계는 증가하며, 유사분열을 방해하는 효과와 일치하는 G-S 단계가 감소했음을 보여줍니다. 5FU 처리 후에는 G1 단계의 세포 인구가 증가하고, S/G2/M 및 G1-S 단계는 DNA 합성에 대한 효과와 일치하게 감소했습니다. 표시된 값은 6개 웰의 평균 ± SEM입니다.

Incucyte® 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하는 THP-1 단핵구를 용매 또는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA; 100 nM)에 노출시키고 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 분석했습니다. PMA는 세포가 분화하여 세포 주기를 G1 단계에서 정지시킵니다. 분석 결과 증식 부족, 적색 세포 비율 증가, G1 단계 증가 및 용매 처리 세포와 비교하여 녹색 세포(S/G2/M 단계) 감소를 보여줍니다. PMA 처리된 세포는 면적이 더 넓어 형태학적 변화와 Incucyte® pHrodo® 적색 세포 표지 키트로 표지된 자멸성 Jurkat 세포의 탐식을 통해 측정된 탐식 잠재력의 일치된 증가를 나타냅니다.

더 깊은 생물학적 통찰력 도출

형광 세포 건강 시약을 다중화하여 약물 스크리닝에서 더 많은 데이터 포인트와 발견을 수집하고 화합물 메커니즘에 대한 통찰력을 추가합니다.

스캔은 Incucyte® SX5에서 획득되고 Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 분석되었습니다. 시간 경과 그래프는 S/G2/M(녹색) 또는 G1(빨간색) 세포 집단과 Annexin V 양성 객체(청록색) 집단을 겹쳐서 보여줍니다. 카보플라틴은 세포를 S/G2/M에서 정지시킵니다. 라파티닙은 특정 세포 수용체를 표적으로 하므로 AU565에 효과적입니다. 캄프토테신은 세포자멸을 유도합니다. 위상 및 형광(녹색, 주황색 NIR) 혼합 이미지는 치료 후 3일의 AU565 세포를 보여줍니다.

세포 주기 분석 기술 자료

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eBook: Live-Cell Analysis 6th Edition Handbook
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라이브 세포 분석 6판 핸드북

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애플리케이션 노트

세포 형태 하위 집단의 고급 레이블 프리 분류

제품 리소스

라이브 세포 모델에서 세포 주기 위상의 실시간 정량화

PDF | 2.2 MB

Incucyte® 세포 주기 그린/오렌지 2.0 시약 (EF1α, Puro)

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Incucyte® 세포 주기 그린/레드 렌티바이러스 2.0 시약 (EF1α, Puro)

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Incucyte® — 시약, 소모품 및 소프트웨어

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세포 주기 자주 묻는 질문

Incucyte® 세포 주기 녹색/빨간색 렌티바이러스는 Incucyte® SX1 및 S3 생세포 분석 시스템과 호환됩니다. 또한 녹색/빨간색 광학 모듈로 구성된 경우 Incucyte® SX5와도 호환됩니다.

Incucyte® 세포 주기 녹색/주황색 렌티바이러스는 녹색/주황색/NIR 광학 모듈로 구성된 경우 Incucyte® SX5와 호환됩니다.


Green/Orange/NIR 광학 모듈과 호환되는 Incucyte® 세포 주기 Green/Orange 렌티바이러스는 Incucyte® Annexin V NIR 또는 Incucyte® Cytotox NIR와 같은 Near-IR 시약과 다중화하여 화합물 메커니즘에 대한 통찰력을 추가할 수 있습니다.


네. 이 시약은 다양한 부착성 및 비부착성 세포 유형과 호환되며 대부분의 세포에서 작동해야 합니다.

세포 유형과의 호환성은 다른 렌티바이러스 시약과 동일할 것이며, 대부분의 암/줄기 세포에서 작동할 수 있지만 면역 세포에서는 그렇지 않을 수 있습니다.


예. 이 시약의 렌티바이러스 전달은 형질전환된 세포주에 대해 무제한 발현을 가능하게 합니다.


아니오. Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스를 세포에 도입해도 세포 형태나 성장에 변화가 없는 비교란적인 방법입니다.


PI를 사용하면 다른 세포 주기 단계를 식별하고 더 정확한 측정을 할 수 있습니다. 하지만 이 방법은 죽은 세포를 사용하며, Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스가 제공하는 장기 동역학과 동일한 세포 내 다중 세포 분열을 연구할 수 없습니다.


Incucyte® 셀바이셀 소프트웨어는 하위 집단을 기반으로 4개의 모든 단계를 정확하게 정량화할 수 있는 장점이 있으며, 기본 분석기로는 3개의 단계만 정량화할 수 있습니다(무색 집단을 계산할 수 없음). 셀바이셀은 라벨 없는 세포 수를 제공하여 증식을 평가할 수 있는 반면, 기본 분석기는 총 영역 컨플루언스를 기반으로 증식을 평가합니다. 세포 형태를 평가하기 위해 셀바이셀은 개별 세포 영역/편심률 측정을 제공하는 반면, 기본 분석기는 정성적 평가에 의존합니다. 마지막으로 셀바이셀은 간단하고 통합된 분석을 제공하는 반면, 기본 분석기는 추가 조작을 위해 데이터 내보내기가 필요합니다.

결론적으로, 셀바이셀 분석이 더 강력하지만 셀바이셀과 기본 분석기 모두 세포 주기의 트렌드와 작용 메커니즘을 감지할 수 있습니다.


Incucyte® 세포 주기 렌티바이러스는 Geminin과 Cdt1 단백질을 사용하여 세포 기능을 변경하지 않고 특정 세포 주기 단계에서 형광 단백질을 표적화하고 분해함으로써 G1을 S|G2|M 단계와 구별합니다.

이러한 시약은 Geminin-TagGFP2(녹색 형광 단백질)와 사용된 시약에 따라 Cdt1-TagRFP(주황색 형광 단백질) 또는 Cdt1-mKate2(적색 형광 단백질)를 모두 발현하는 단일 카세트 표지자를 포함합니다.

따라서:

: 세포는 적색(Cdt1-TagRFP) 또는 주황색(Cdt1-mKate2)으로 형광을 발합니다

: 세포가 녹색으로 형광 발광 (Geminin-TagGFP2)

: 세포는 무색

: 세포가 노란색으로 나타납니다 (녹색과 빨간색/주황색의 조합)


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