미토콘드리아 막 전위차 분석
미토콘드리아 막 전위(MMP 또는 ΔΨm)는 전자 전달 사슬을 통해 ATP를 합성하는 데 필요한 수소 이온의 전기화학적 전위를 유지하는 데 필수적인 요소이며, 미토콘드리아 건강의 중요한 요인으로 입증되었습니다. 정상적인 생리 활동에서 MMP는 비교적 안정적으로 유지됩니다. 그러나 장기간의 교란은 세포 건강과 생존에 유해한 영향을 미치고 다양한 병태생리학적 상태를 초래할 수 있습니다. MMP를 모니터링하면 미토콘드리아의 무결성에 대한 민감하고 조기의 지표를 제공하며, 당뇨병, 암, 신경퇴행성 질환과 같은 병리학적 질병과 관련된 미토콘드리아 기능 장애를 식별하는 데 중요합니다.
미토콘드리아 막 전위(MMP)를 평가하는 일반적인 분석법은 형태학적 변화로 쉽게 검증할 수 없는 간접적이고 연결된 최종 지점 측정에 의존하는 경우가 많습니다. Incucyte® 미토콘드리아 막 전위 분석법은 생세포 내 MMP의 일시적이고 장기적인 변화를 실시간으로 감지할 수 있으며, 세포 건강에 대한 추가 측정을 위해 세포 표지, 세포사멸 또는 세포독성 시약과 다중 분석이 가능합니다. MMP의 변화를 지속적으로 추적하여 세포 항상성과 질병의 복잡성을 밝혀냅니다.
세포 배양기 내에서 MMP의 변화를 실시간으로 자동으로 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션입니다. TMRE 및 TMRM 분석법과 유사하게, 세포 투과성 Incucyte® MMP 오렌지 시약은 미토콘드리아 막을 가로지르는 전기화학 경사도에 의해 생성된 ΔΨm에 비례하여 활성 미토콘드리아에 축적됩니다. MMP의 감소는 미토콘드리아 기능 및/또는 무결성의 파괴를 나타내며 세포사멸의 초기 지표로도 사용될 수 있습니다.
이 분석 키트는 두 가지 대조 화합물을 사용합니다: FCCP(미토콘드리아 막을 가로지르는 H+ 이온을 운반하고 탈분극을 유발하는 탈커플링제, 형광 감소로 나타남)와 올리고마이신 A(ATP 합성효소 억제제로 과분극을 유발하며 형광 증가로 나타남).
Incucyte® MMP 오렌지 시약 키트를 활용하여, 간단한 혼합 및 판독 프로토콜로 MMP의 변화를 신속하게 시각화하고 정량화하기
라이브 세포에서 자동화된, 정량적이고 재현 가능한 MMP 측정을 생성합니다. 시간에 따른 형광 강도를 측정하여 MMP의 변화를 정량화합니다.
HeLa 세포를 비히클, 캄프토테신, FCCP, 또는 올리고마이신으로 처리하고, 시간에 따른 화합물의 미토콘드리아 막 전위에 대한 영향을 모니터링하기 위해 Incucyte® MMP 오렌지 염료를 사용했습니다 (A). 0시간과 40시간의 대조군 및 약물 처리된 웰의 평균 형광 강도 히스토그램은 화합물로 유도된 미토콘드리아 극성 변화를 강조합니다 (B). 라벨 없는 세포 계수는 Incucyte® 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다 (C). 6시간(비히클, FCCP, 올리고마이신) 또는 40시간(캄프토테신)에 획득된 HD 위상/형광 이미지 (D).
싸토리우스 Incucyte® MMP 오렌지 시약 키트는 Incucyte® 카스파제 3/7, 아넥신 V 또는 Cytotox 염료와 다중화하여 시간에 따른 세포 형태 변화를 시각화하는 것 외에도 세포 사멸 또는 세포독성을 정량화할 수 있습니다.
HeLa 세포를 단백질 키나아제 억제제인 스타우로스포린(SSP)으로 처리하여 Incucyte® MMP 오렌지 및 Cytotox NIR 염료 존재 하에 화합물의 미토콘드리아 막 전위 및 세포독성에 대한 영향을 평가했습니다(A). 두 MMP 및 Cytotox NIR 분석의 농도-반응 곡선이 표시되었습니다(24시간 데이터, B). 대조군, 0.3 µM SSP, 3 µM SSP 처리된 웰의 대표적인 HD 위상 + 형광 이미지(24시간 시점, C).
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TMRE와 TMRM 분석과 마찬가지로, 세포 투과성 Incucyte® MMP 오렌지 시약은 미토콘드리아 막을 가로지르는 전기화학 경사에 의해 생성된 ΔΨm에 기반하여 활성 미토콘드리아에 축적됩니다. MMP의 감소는 미토콘드리아 기능 장애 또는 손상을 나타내며, 세포 사멸의 초기 징후로도 볼 수 있습니다.
미토콘드리아 기능의 이상은 당뇨병, 암, 신경퇴행성 질환과 같은 질병과 연관되어 있어, 미토콘드리아의 무결성을 평가할 수 있는 능력은 다양한 병태생리를 이해하는 데 중요할 수 있습니다.
네, Incucyte® MMP Orange Kit는 다른 세포 건강 시약(예: Incucyte® 카스파제, 3/7, 아넥신 V 또는 Cytoox 염료)과 함께 사용하여 세포 사멸과 세포독성을 평가하고, 시간에 따른 세포 형태 변화를 시각화할 수 있습니다.
이 키트에는 Incucyte® MMP 오렌지 염료와 함께 두 가지 대조 물질이 포함되어 있습니다: FCCP는 미토콘드리아 막을 가로지르는 H+ 이온을 이동시켜 탈분극을 유발하는 탈커플링제(감소된 형광으로 나타남)이며, 올리고마이신 A는 ATP 합성효소 억제제로 과분극을 초래합니다(증가된 형광으로 반영됨).
아니요. 서로 다른 획득 방법(이중 여기/단일 방출을 사용하는 대사)과 Incucyte® MMP 및 Incucyte® CytoATP가 오렌지 채널에서 판독되기 때문에 이 두 분석을 다중화할 수 없습니다.
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