개요

통합된 이미지 획득 및 분석을 통해 라벨링 시약으로 인해 발생할 수 있는 인공 산물을 줄여 생물학적 통찰력을 개선하고, 생존 세포와 사멸 세포 또는 분화 상태를 식별합니다.

다양한 형태학적 특성을 가진 6가지 세포 유형에 대해 캄프토테신(CMP, 0.1 – 10 µM), 스타우로스포린(STP, 1 – 1000 nM), 그리고 시스플라틴(CIS, 0.5 – 50 µM)의 농도 범위로 처리하면서 Incucyte^® 아넥신 V 시약 존재 하에 라벨링 없는 생존/사멸 분석을 수행했습니다. 이미지는 Incucyte^® 부착 세포 단위 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 획득 및 분할되었으며, 고급 라벨링 없는 분류 및 형광 분류(아넥신 V)를 통해 사멸 세포를 정량화했습니다. 이미지는 CMP로 처리된 A549 세포, STP로 처리된 HeLa 세포, CIS로 처리된 HT1080 세포의 생존 및 사멸 형태를 보여줍니다. 고급 라벨링 없는 분류 시간 경과는 72시간 동안 사멸 세포의 비율 증가를, 아넥신 V 시간 경과는 72시간 동안 아넥신 V 양성 세포의 비율 증가를 보여줍니다. 두 방법의 시간 경과 및 농도 반응 곡선은 비교 가능합니다.

강력하고 목적에 맞게 제작된 소프트웨어를 사용하여 세포 분화의 라벨 프리 분류로 반복 가능한 실험 결과를 달성하세요.

라벨 프리 분화 분석은 PMA(100 nM)를 사용하여 대식세포 표현형으로 분화된 THP-1 단핵구에서 수행되었으며, Fabfluor-488로 표지된 CD11b(대식세포 마커)가 존재합니다. 이미지는 Incucyte 부착세포 단위 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 획득 및 분할되었으며, 대식세포는 고급 라벨 프리 분류와 형광 분류(CD11b)를 모두 사용하여 정량화되었습니다. 위상 HD 및 형광 혼합 이미지는 세포가 단핵구에서 대식세포로 분화함에 따라 형태 변화와 CD11b 발현(녹색 형광) 증가를 보여줍니다. 대식세포 비율의 시간 경과는 분화된 세포의 증가를 보여주며, 형태학적 변화가 CD11b의 상향 조절보다 약간 앞서 나타납니다(0 - 24시간). 분화는 48시간 후 두 방법 모두 최대 80% 대식세포 집단에서 안정화됩니다.

96- 및 384-웰 포맷에서 이미지 기반 세포 형태학 분석을 위해 머신러닝을 활용하여 획기적인 처리량을 달성하세요.

고급 무표지 분류법을 사용하여 세포독성 작용제를 식별했습니다. 세포는 14개의 다양한 작용 메커니즘을 가진 화합물로 96-웰 스크린에서 처리되었으며, 사멸 대조군으로 CMP(10 µM, 세포 사멸 유도)가 포함되었습니다. 고급 무표지 분류법을 사용하여 사멸 세포 비율을 정량화했습니다. 96-웰 플레이트의 심층 보기는 처리 72시간 후 생존 세포(녹색)와 사멸 세포(빨간색) 분류 마스크를 보여주어 사용자에게 어떤 화합물과 농도가 세포독성인지 신속하게 파악할 수 있게 합니다.

A549 세포를 CMP의 농도 범위(0.1 – 10 µM)로 처리하여 세포 사멸을 유도했습니다. 전체 형태의 고급 무표지 분류(다변량 분석, 왼쪽) 또는 세포 원형도를 설명하는 단일 지표(단변량 분석, 오른쪽)를 사용하여 사멸한 세포의 %를 정량화했습니다. 시간 경과는 각 방법에 따른 시간별 사멸 세포의 %를 보여줍니다. 고급 무표지 분류는 예상되는 시간 및 농도 의존적 세포 사멸 증가를 나타내며, 이 시간 경과는 아넥신 V 검증 연구와 비교할 수 있습니다. 세포 원형도의 단변량 분석은 72시간에 농도 의존적 사멸 세포 % 증가를 보여주지만, 용매는 시간에 따라 변화하는 높은 수준의 세포 사멸을 나타냅니다. 이 데이터는 이미지의 시각적 분석으로 뒷받침되지 않습니다.

여러 세포 유형에서 형광 시약 유무와 관계없이 수행된 생존/사멸 및 분화 분석으로, Incucyte® 세포별 또는 고급 레이블 프리 형태학적 분석을 통해 결과 검증. 형광 시약과 비교했을 때 Incucyte® 고급 레이블 프리 분류 분석을 통해 생성된 레이블 프리 데이터는 동등하고 재현 가능한 결과를 확인했습니다.

윤곽선은 세포 분절을 나타내고 색상은 클래스를 나타냅니다 (빨간색 = 사멸, 자홍색 = 생존 수상돌기 형태, 청록색 = 생존 아메바 형태). iPSC 유래 미세아교세포를 96-웰 플레이트에 웰당 12K 세포로 파종했습니다. 세포는 특정 미세아교세포 배지에서 유지되며 정기적으로 배지를 교체했습니다. 배양은 Incucyte^®에서 모니터링되었으며, Incucyte^® AI 세포 건강 분석을 사용하여 생존율을 정량화했습니다. 고급 무표지 분류를 사용하여 생존 가능한 세포 집단의 특성을 파악하고 수상돌기 (휴지) 형태와 아메바 (활성화) 형태의 세포 비율을 결정했습니다. 세포는 주로 휴지 상태를 유지했지만, 배양 48시간 후 생존율이 급격히 떨어졌습니다.