NETosis 분석을 위한 생세포 분석

개요

실시간 호중구 세포외 트랩 정량화

호중구는 감염 부위에서 선천성 면역 시스템의 첫 방어선으로, 호중구 세포외 트랩(NETs) 방출을 포함한 여러 전략을 통해 미생물을 분해하고 제거합니다. NETs는 NETosis라고 불리는 특정 형태의 프로그램된 호중구 세포 사멸 과정에서 방출되는 항균 단백질과 DNA로 구성된 그물 구조입니다. NETs는 병원체를 포획하고 분해하는 숙주 방어 전략이지만, 류마티스 관절염을 포함한 다양한 자가면역 질환 및 병리학적 상태와 연관되어 있습니다.

우리의 전략

Incucyte® 라이브 세포 이미징 시스템과 Incucyte® Cytotox Green 시약을 사용하면 실시간으로 NETosis를 진행하는 호중구를 자동으로 정량화할 수 있습니다. Incucyte® 라이브 세포 시약 및 분석을 사용하면 핵의 부종 및 탈응축 단계, 그리고 NET 방출을 관찰하고 측정할 수 있습니다.

NETosis 분석

Incucyte® NETosis 분석법 소개

조직 배양 배양기 내에서 실시간으로 96웰 형식으로 NETosis를 자동으로 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션.

®PMA로 처리된 인간 호중구의 NETosis 실시간 감지 (왼쪽). 믹스 앤 리드 IncuCyte Cytotox Green 시약을 사용하여 NETosis 과정의 호중구를 녹색으로 표시하고 IncuCyte 생세포 분석 시스템을 통해 실시간으로 정량화합니다.

주요 장점

  • - Incucyte 생세포 분석을 통해 NETosis와 관련된 고유한 형태학적 변화를 검증할 수 있습니다 - 다엽핵의 상실, 핵 탈응축 및 막 손상을 실시간으로 추적합니다.
  • - 세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 치료 효과가 언제 어떻게 발생했는지 확인 - 민감한 세포에 이상적
  • ; 세척, 고정, 리프팅 없음 - IncuCyte Cytotox Green 시약의 믹스 앤 리드(mix-and-read) 방식을 활용하여 세포 외 DNA가 방출되고 형광이 증가함에 따라 NETosis를 신속하게 시각화하고 정량화
  • - Incucyte® Annexin V Red 시약을 Cytotox Green 시약과 결합하여 다중 측정 - 세포자멸사와 NETosis를 쉽게 구별

NETosis를 타임랩스 이미징으로 검증

Incucyte® 실시간 세포 분석은 NETosis와 관련된 고유한 형태학적 변화의 검증을 허용하며, 다엽핵의 소실, 핵 탈응축, 막 손상을 실시간으로 추적할 수 있습니다.

DMSO(1.25% v/v)와 ATRA(0.1 µM)로 분화된 HL-60 세포의 IncuCyte 이미지는 IncuCyte Cytotox Green 시약 존재 하에 PMA를 사용하여 자극됩니다. 자극 후 약 2시간에 핵의 특징적인 탈응축을 주목하세요. 세포질이 핵질과 혼합됨에 따라 위상 이미지에서 더 이상 핵이 보이지 않습니다. 핵 내용물은 plasma 막으로 이동하여 방출되며, 외부 DNA가 IncuCyte Cytotox Green 시약에 결합하여 형광 증강(녹색)이 관찰됩니다.

자동화된 Incucyte Cytotox Green을 사용한 전체 분석 시간 과정에 대한 자동 분석

세포를 안정적인 배양기 환경에서 제거하지 않고 처리 효과가 언제 어떻게 발생했는지 확인 - 민감한 세포에 이상적

IncuCyte NETosis 분석을 통해 96웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징 및 분석(형광 이미지)하여 시간에 따른 호중구 생리학의 동적 판독값을 제공할 수 있습니다(왼쪽 그래프). 영역 필터(오른쪽 그래프, 300 µm2 미만 객체 제외)가 있는 통합 Incucyte® 기본 분석 소프트웨어를 사용하면 세포사멸(CMP 처리, 작은 표지된 세포, 생존력 상실과 함께 핵만 형광) 및 NETosis(PMA 처리, 핵 내용물이 세포막으로 이동 및 방출, 외부 DNA 표지) 유도 처리를 구별할 수 있습니다.

약리학적 스크리닝에 적합한 간단한 혼합 및 판독 96웰 프로토콜; 세척, 고정, 들어올림 없음

믹스-앤-리드 Incucyte Cytotox Green 시약을 활용하여, 세포 외 DNA가 방출되고 형광이 증가함에 따라 NETosis를 신속하게 시각화하고 정량화합니다.

Incucyte Cytotox Green을 사용하여 전체 분석 시간 과정에 걸쳐 자동화된 분석

dHL-60 세포를 NADPH 산화효소 억제제인 디페닐렌 요오도늄(DPI)의 농도를 점진적으로 증가시켜 처리했습니다. 세포를 PMA로 자극하고 간단한 혼합 및 판독 프로토콜을 사용하여 Incucyte Cytotox 녹색 시약으로 표지했습니다. 시간 경과 그래프는 DPI의 농도 증가에 따라 억제되는 100 nM PMA로 시간에 따른 총 녹색 객체 영역의 증가를 보여줍니다(A); IncuCyte에서 촬영한 플레이트 뷰는 각 억제제의 농도 의존적 반응(억제제당, 농도당 n=3)과 함께 명확한 양성 및 음성 대조군 반응(H행)을 보여줍니다(B); 곡선하 면적 분석을 통해 명확한 농도 의존적 반응을 표시할 수 있습니다(C).

다중화된 세포자멸사 판독으로 메커니즘 통찰력 확보

Incucyte® Annexin V Red 시약과 Incucyte Cytotox Green 시약을 결합하여 다중 측정 - 세포자멸사와 NETosis를 쉽게 구별할 수 있습니다.

PMA 또는 이오노마이신으로 자극된 세포를 Incucyte Cytotox Green 시약(NETosis - 밝은 형광, 큰 객체 영역) 또는 Incucyte Annexin V Red(PS 외재화 - 낮은 형광)로 표지하여 차별적인 호중구 세포 사멸을 감지합니다.

주문 정보

Incucyte Cytotox Green 및 Annexin V Red 시약은 Incucyte 생세포 분석 시스템과 함께 사용하기 위해 완전히 검증되었으며, 동일한 웰 내에서 NETosis 및 세포자멸사의 다중 측정을 위해 결합될 수 있습니다.

제품

수량

카탈로그 번호

인쿠사이트 사이토톡스 그린 시약 (사멸 세포 계수용)

5 uL x 5

4633

Incucyte® Annexin V Red 시약 (세포자멸사용)

100회 검사

4641


기술 자료

문학 및 문서

브로셔

Incucyte® 시약, 소모품 및 소프트웨어

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프로토콜 — 인큐사이트® 네토시스 분석

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면역학 연구를 위한 검정법 브로셔

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포스터 — 호중구 외포 실시간 시각화 및 정량화

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인간 호중구의 호중구 세포외 트랩(NETosis) 정량화 및 세포 사멸 메커니즘을 구분하는 고처리량 실시간 이미징 기법

. Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. , 200: 869-879, 2017

인큐사이트 플랫폼은 호중구의 NETosis를 신속하고 자동화되며 재현 가능한 방식으로 정량화하는 혁신적인 실시간 분석 방법으로, 호중구 연구를 크게 최적화합니다. 이 플랫폼은 호중구 생리학과 NETosis를 평가하고 새로운 호중구 타겟을 신속하게 개발하고 테스트할 수 있는 강력한 도구입니다.

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