생세포 분석을 위한 NETosis 분석법

개요

실시간으로 호중구 세포외 트랩을 정량화하기

호중구는 감염 부위의 최전선 방어선으로서 선천성 면역 체계에서 필수적인 역할을 하며, 호중구 세포외 트랩(NET) 방출을 포함한 다양한 전략을 통해 미생물을 분해하고 사멸시킵니다. NET는 항균 단백질과 DNA로 구성된 그물 모양 구조로, NETosis라고 알려진 특수한 형태의 호중구 세포 사멸 과정에서 방출됩니다. NET는 병원체를 포획하고 분해하는 숙주 방어 전략이지만, 류마티스 관절염을 비롯한 다양한 자가면역 질환 및 병리학적 상태와도 관련이 있는 것으로 알려져 있습니다.

우리의 전략

Incucyte® 생세포 이미징 시스템과 Incucyte® 사이토톡스 그린 시약을 사용하면 NETosis를 겪는 호중구를 실시간으로 자동 정량화할 수 있습니다. Incucyte® 생세포 시약과 분석을 통해 핵의 팽창 및 탈응축, 그리고 NET 방출에 이르는 NETosis 단계를 관찰하고 측정할 수 있습니다.

NETosis 분석

Incucyte® NETosis 분석법 소개

조직 배양기 내에서 96웰 형식으로 NETosis를 실시간으로 자동 시각화하고 정량화하는 통합 솔루션입니다.

IncuCyte를 사용하여 NETosis를 측정하세요®생세포 NETosis 분석.Real-time detection of NETosis in human neutrophils treated with PMA (left). Neutrophils undergoing NETosis are labeled green using the mix-and-read IncuCyte Cytotox Green Reagent and quantified in real time using the IncuCyte Live-Cell Analysis System.

주요 장점

  • - Incucyte® 실시간 세포 분석을 통해 NETosis와 관련된 뚜렷한 형태학적 변화를 검증할 수 있습니다. 다엽핵 소실, 핵 탈응축 및 막 손상을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.
  • - 세포를 배양기의 안정적인 환경에서 꺼내지 않고 치료 효과가 언제 어떻게 나타났는지 확인할 수 있습니다. - 민감한 세포에 이상적입니다.
  • 세척, 고정, 리프팅 과정이 필요 없습니다. 혼합 후 판독이 간편한 인큐사이트 사이토톡스 그린 시약을 사용하여 세포외 DNA가 방출되어 형광 증강이 일어나는 NETosis 현상을 신속하게 시각화하고 정량화할 수 있습니다.
  • - Incucyte® Annexin V Red 시약과 Cytotox Green 시약을 혼합하여 다중 측정을 수행하고, 세포사멸과 NETosis를 쉽게 구별할 수 있습니다.

타임랩스 이미징을 사용하여 NETosis를 검증합니다.

Incucyte® 실시간 세포 분석을 통해 NETosis와 관련된 뚜렷한 형태학적 변화를 검증할 수 있습니다. 다엽핵 소실, 핵 탈응축 및 막 손상 과정을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

IncuCyte Cytotox Green 시약 존재 하에 PMA로 자극된 DMSO(1.25% v/v) 및 ATRA(0.1 µM)로 분화된 HL-60 세포의 IncuCyte 이미지입니다. 자극 후 약 2시간이 지나면 핵의 특징적인 탈응축이 관찰됩니다. 세포질과 핵질이 혼합되면서 위상차 이미지에서 핵이 더 이상 보이지 않습니다. 핵 내용물이 세포막으로 이동하여 방출되고, 외부 DNA가 IncuCyte Cytotox Green 시약에 결합하여 형광 증강(녹색)이 관찰됩니다.

Incucyte Cytotox Green을 사용한 전체 분석 시간 경과에 걸친 자동 분석

세포를 배양기의 안정적인 환경에서 꺼내지 않고 치료 효과가 언제 어떻게 나타났는지 확인할 수 있습니다. 이는 민감한 세포에 이상적입니다.

IncuCyte NETosis 분석법은 96웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 촬영하고 분석(형광 이미지)하여 시간에 따른 호중구 생리 변화를 동적 그래프로 보여줍니다(왼쪽 그래프). 통합된 IncuCyte® 기본 분석기 소프트웨어와 영역 필터(오른쪽 그래프, 300µm² 미만 영역 제외)를 사용하면 세포 사멸(CMP 처리, 더 작은 세포에 표지, 핵만 형광을 띠며 생존력 상실)과 NETosis(PMA 처리, 핵 내용물이 세포막으로 이동하여 방출되고 외부 DNA에 표지됨) 유도 처리를 구분할 수 있습니다.

약물 스크리닝에 적합한 간편한 혼합 및 판독 방식의 96웰 프로토콜; 세척, 고정, 리프팅 과정이 필요 없습니다.

혼합 후 바로 판독할 수 있는 Incucyte Cytotox Green 시약을 사용하여 세포외 DNA가 방출되어 형광 증강이 일어나는 NETosis 현상을 신속하게 시각화하고 정량화할 수 있습니다.

Incucyte® Cytotox Green을 사용한 전체 분석 시간 경과에 걸친 자동 분석

dHL-60 세포에 NADPH 산화효소 억제제인 디페닐렌 요오도늄(DPI)을 다양한 농도로 처리했습니다. 그런 다음 PMA로 세포를 자극하고 간단한 혼합 및 판독 프로토콜을 사용하여 Incucyte Cytotox green으로 염색했습니다. 시간 경과 그래프는 100 nM PMA에서 시간에 따라 전체 녹색 영역이 증가하는 것을 보여주며, 이는 DPI 농도가 증가함에 따라 억제됩니다(A). IncuCyte에서 얻은 플레이트 이미지는 명확한 양성 및 음성 대조군 반응(H행)과 각 억제제에 대한 농도 의존적 반응을 보여줍니다(억제제당, 농도당 n=3)(B). 곡선 아래 면적 분석을 통해 명확한 농도 의존적 반응을 확인할 수 있습니다(C).

세포사멸 지표를 이용한 다중 분석은 기전적 통찰력을 제공합니다.

Incucyte® Annexin V Red 시약과 Incucyte Cytotox Green 시약을 결합하여 다중 측정을 수행하고 세포 사멸과 NETosis를 쉽게 구별하십시오.

PMA 또는 이오노마이신으로 자극된 세포에 Incucyte Cytotox Green Reagent(NETosis - 밝은 형광, 넓은 영역) 또는 Incucyte Annexin V Red(PS 외부화 - 낮은 형광)를 표지하여 호중구 세포 사멸의 차이를 검출했습니다.

주문 정보

Incucyte Cytotox Green 및 Annexin V Red 시약은 Incucyte Live-Cell Analysis System과의 사용에 대해 완벽하게 검증되었으며, 동일한 웰 내에서 NETosis 및 세포 사멸을 다중 측정하기 위해 함께 사용할 수 있습니다.

제품

수량

고양이. 아니요.

IncucyteCytotox Green 시약 (사멸 세포 계수용)® 

5μL x 5

4633

Incucyte® Annexin V Red Reagent for apoptosis

100개의 테스트

4641


기술 자료

문헌 및 자료

브로셔

Incucyte® 시약, 소모품 및 소프트웨어

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프로토콜 — Incucyte® NETosis 분석

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소책자 — 면역학 연구용 분석법

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포스터 — 호중구 분비의 실시간 시각화 및 정량화...

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인간 호중구에서 NETosis를 정량화하고 세포 사멸 메커니즘을 구분하기 위한 고처리량 실시간 이미징 기술.

. 굽타 S, 찬 DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. , 200: 869-879, 2017

“인큐사이트 플랫폼은 신속하고 자동화된 방식으로 재현 가능한 NETosis 정량화를 가능하게 하는 혁신적인 실시간 분석법으로, 호중구 연구를 획기적으로 최적화합니다. 이 플랫폼은 호중구 생리 및 NETosis를 평가하고 새로운 호중구 표적을 신속하게 개발 및 테스트하는 데 강력한 도구입니다.”