NETosis 분석을 위한 생세포 분석
호중구는 감염 부위에서 선천성 면역 시스템의 첫 방어선으로, 호중구 세포외 트랩(NETs) 방출을 포함한 다양한 전략을 통해 미생물을 분해하고 제거합니다. NETs는 NETosis라고 불리는 특정 형태의 프로그램된 호중구 세포 사멸 과정에서 방출되는 항균 단백질과 DNA로 구성된 그물 구조입니다. NETs는 병원체를 포획하고 분해하는 숙주 방어 전략이지만, 류마티스 관절염을 포함한 다양한 자가면역 질환과 병리학적 상태와 연관되어 있습니다.
Incucyte® 생세포 이미징 시스템과 Incucyte® Cytotox Green 시약을 사용하면 실시간으로 NETosis를 진행 중인 호중구를 자동으로 정량화할 수 있습니다. Incucyte® 생세포 시약과 분석을 통해 핵의 부종 및 탈응축 단계, 그리고 NET 방출 과정을 관찰하고 측정할 수 있습니다.
96웰 포맷으로 조직 배양 배양기 내부에서 실시간으로 NETosis를 자동으로 시각화하고 정량화하는 통합 솔루션.
®PMA로 처리된 인간 호중구에서 NETosis의 실시간 검출 (왼쪽). 믹스 앤 리드 IncuCyte 세포독성 그린 시약을 사용하여 NETosis 과정의 호중구를 초록색으로 표시하고 IncuCyte 생세포 분석 시스템으로 실시간 정량화.
인쿠사이트® 생세포 분석을 통해 NETosis와 관련된 특징적인 형태학적 변화를 실시간으로 검증할 수 있습니다 - 다엽핵의 소실, 핵 탈응축, 막 손상을 추적합니다.
DMSO (1.25% v/v)와 ATRA (0.1 µM)로 분화된 HL-60 세포의 인쿠사이트® 이미지로, 인쿠사이트® 세포독성 그린 시약을 사용하여 PMA로 자극했습니다. 자극 후 약 2시간 경과 시점의 특징적인 핵 탈응축을 확인하세요. 세포질과 핵질이 혼합됨에 따라 위상 이미지에서 핵이 더 이상 보이지 않습니다. 핵 내용물이 세포막으로 이동하여 방출되며, 외부 DNA가 인쿠사이트® 세포독성 그린 시약에 결합하여 형광 증강(녹색)이 관찰됩니다.
배양기의 안정적인 환경에서 세포를 제거하지 않고 처리 효과가 언제 어떻게 발생했는지 확인 - 민감한 세포에 이상적입니다.
싸토리우스의 IncuCyte NETosis 분석법을 통해 96웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징하고 분석(형광 이미지)할 수 있어, 호중구 생리학의 시간에 따른 동적 판독값을 제공합니다(왼쪽 그래프). 영역 필터(오른쪽 그래프, 300 µm2 미만 객체 제외)가 포함된 통합 Incucyte® 기본 분석 소프트웨어를 사용하면 세포자멸사(CMP 처리, 작고 표지된 세포, 생존력 상실로 인해 핵만 형광을 띰)와 NETosis(PMA 처리, 핵 내용물이 세포막으로 이동 및 방출되고 외부 DNA가 표지됨)를 유발하는 처리를 구별할 수 있습니다.
Incucyte Cytotox Green 시약을 활용하여 세포 외 DNA가 방출되고 형광이 증가함에 따라 NETosis를 신속하게 시각화하고 정량화하세요.
dHL-60 세포를 NADPH 산화효소 억제제인 디페닐렌 요오도늄(DPI)의 농도를 점진적으로 증가시키며 처리했습니다. 세포를 PMA로 자극하고 간단한 혼합-판독 프로토콜을 사용하여 Incucyte Cytotox green으로 표지했습니다. 시간 경과 그래프는 DPI 농도 증가에 따라 억제되는 100 nM PMA로 총 녹색 객체 영역이 시간에 따라 증가함을 보여줍니다(A); IncuCyte에서 촬영한 플레이트 뷰는 각 억제제의 농도 의존적 반응(억제제당 농도별 n=3)과 함께 명확한 양성 및 음성 대조군 반응(H행)을 보여줍니다(B); 곡선 아래 면적 분석을 통해 명확한 농도 의존적 반응을 표시할 수 있습니다(C).
Incucyte® 아넥신 V Red 시약을 Incucyte Cytotox Green 시약과 결합하여 다중 측정 수행 - 세포자멸사와 호중구 세포사(NETosis)를 쉽게 구별할 수 있습니다.
PMA 또는 이오노마이신으로 자극된 세포를 인큐사이트 사이토톡스 그린 시약(NETosis - 밝은 형광, 큰 객체 영역)이나 인큐사이트 아넥신 V 레드(PS 외재화 - 낮은 형광)로 표지하여 차별적인 호중구 세포 사멸을 감지합니다.
인큐사이트 사이토톡스 그린 및 아넥신 V 레드 시약은 인큐사이트 생세포 분석 시스템과 함께 사용하기 위해 완전히 검증되었으며, 동일한 웰 내에서 NETosis와 세포자멸사의 다중 측정을 결합할 수 있습니다.
제품
수량
카탈로그 번호
5 μL x 5
4633
100회 테스트
4641
. 구프타 S, 챈 DW, 잘 KJ, 카플란 MJ. , 200: 869-879, 2017
싸토리우스 인큐사이트 플랫폼은 신속하고 자동화되며 재현 가능한 방식으로 호중구 세포사(NETosis)를 정량화하는 혁신적인 실시간 분석 방법입니다. 이 플랫폼은 호중구의 생리학과 세포사를 평가하고, 새로운 호중구 타겟을 신속하게 개발하고 테스트할 수 있는 강력한 도구입니다.
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