활성화된 T세포의 세포 크기 증가 및 형태학적 변화에 기반한 하위 집단 분류. PBMC에 항-CD3 및 IL-2 또는 대조군 용액을 처리하고 Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 이용하여 시간에 따른 변화를 관찰하였다. (A-D) 활성화는 평균 세포 면적과 편심률의 시간 의존적 증가를 유도한다(모든 세포). 편심률의 변화가 면적 증가보다 먼저 나타나는 것을 확인할 수 있다. 세포별 면적 분포(E) 및 밀도 플롯(F-H)은 활성화 후 시간에 따른 이질성 증가와 높은 편심률을 가진 큰 세포 집단의 출현을 보여준다. 표시된 값은 12개 웰의 평균 ± 표준오차이다.

(A-C) 세포 밀도 플롯은 활성화된 T 세포에서 시간 및 세포 면적(위상)에 따른 CD71( ) 형광 증가를 보여줍니다. (D) CD4+ 세포가 아닌 CD71+ 세포의 비율이 활성화 후 동적으로 변화합니다. (E) 하위 집단 분석 결과, 크기가 큰 세포(>100 mm)에서 작은 세포(<110 mm)에 비해 CD71 발현이 우선적으로 상향 조절됨을 보여줍니다. 이러한 데이터는 활성화에 의해 유도되는 시간 의존적인 CD71 발현 증가와 세포 크기와 CD71 사이의 강력한 연관성을 보여주며, 활성화 4일 후에는 큰 세포의 90% 이상이 CD71을 발현합니다.

세 명의 공여자로부터 새로 분리한 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 유세포 분석법 또는 FabFluor-488 표지 항체를 사용하여 6가지 CD 마커와 IgG 대조군에 대해 특성화했습니다. 세 명의 공여자의 평균값(A) 또는 각 공여자의 값(B)을 고려했을 때 두 방법 간에 강한 상관관계가 관찰되었습니다.

A549, SKOV-3 또는 SkBr3 세포에서 FabFluor-488로 표지된 항체를 사용하여 HER2 발현을 분석했습니다. 이미지(상단 행)와 형광 정량 분석(하단 행) 결과, A549 세포에서는 HER2 발현이 나타나지 않았고, SKOV-3 세포에서는 불균일한 발현이, SkBr3 세포에서는 균일하고 높은 발현이 관찰되었습니다. 동종항체 대조군은 음성 대조군을 나타냅니다.

시스플라틴 또는 플루오로우라실(5FU) 처리 후 (INSERT LINK)를 발현하는 HT1080 섬유육종 세포에서 세포주기 단계 분포를 정량화했습니다. 24시간 후 반응은 세포 이미지로 나타냈습니다(윤곽선은 Incucyte Cell-by-Cell Analysis 소프트웨어로 식별된 개별 세포를 나타냅니다)(A). 시스플라틴 처리 후, G1기(녹색 형광)에 있는 세포의 비율은 감소하고(B), S/G2/M기(적색 형광)에 있는 세포의 비율은 증가합니다(C). 이는 시스플라틴이 세포 분열을 억제하는 것으로 알려진 작용 기전과 일치합니다. 5FU 처리 후에는 G1기에 있는 세포의 비율이 증가하고(E), S/G2/M기에 있는 세포의 비율은 감소합니다(F). 이는 5FU가 DNA 합성을 억제하는 것으로 알려진 효과와 일치합니다. 농도 반응 곡선(D 및 G)은 24시간 후 세포주기의 모든 단계에 대한 화합물의 효과를 보여줍니다.

세포 건강 상태는 Incucyte^® NucLight Red(핵 생존 마커)와 비침습성 Incucyte^® Caspase 3/7 Green Reagent(세포 사멸 지표)의 다중 판독을 통해 측정하였다. 세포 이미지는 24시간 후의 반응을 분류 마스킹과 함께 보여준다(A 및 E). 세포 하위 집단은 Incucyte Cell-by-Cell Analysis Software 도구를 사용하여 적색 및 녹색 형광을 기준으로 분류하였다(B 및 F). CPT 처리 후, 생존 세포 감소를 나타내는 적색 형광 감소, 초기 세포 사멸을 나타내는 적색 및 녹색 형광 증가, 그리고 후기 세포 사멸을 나타내는 녹색 형광 증가가 관찰되었다(C). CHX 처리 후에는 세포 사멸이 관찰되지 않았다(G). 초기 세포 사멸 집단의 농도 반응 시간 경과를 나타낸다(적색 및 녹색 형광을 나타내는 전체 세포의 백분율, D 및 H). 표시된 값은 3개 웰의 평균 ± 표준오차이다.