레트로바이러스 검사

레트로바이러스

레트로바이러스 검사 요구사항 충족

레트로바이러스는 매우 복잡한 생활주기를 가진 바이러스 계열입니다. 특히 많은 생산 세포주, 심지어 모든 세포주에서 프로바이러스 형태로 내인성 바이러스가 존재하기 때문에 우려의 대상이 됩니다. 예를 들어, CHO 세포는 투과 전자 현미경(TEM)으로 관찰 가능한 바이러스 입자를 생성할 수 있는 내인성 바이러스를 가지고 있습니다. 이 바이러스는 비감염성이지만, NS0과 같은 일부 마우스 세포주는 감염성 레트로바이러스를 생성합니다.

국제 의약품 규제 조화 위원회(ICH) 가이드라인(섹션 3.2.1)에서는 제조 공정의 세 단계, 즉 마스터 세포 뱅크(MCB), 최종 생산 세포 뱅크(EOP), 그리고 대량 수확 단계에서 적용되는 레트로바이러스 검사를 설명합니다. 가이드라인에 설명된 검사에는 민감성 세포 배양을 이용한 감염성 검사와 투과 전자 현미경(TEM) 연구가 포함됩니다. 감염성 레트로바이러스가 검출되지 않고, TEM에서 레트로바이러스 또는 레트로바이러스 유사 입자가 관찰되지 않은 경우에만 추가 검사가 필요합니다. 이 경우, 레트로바이러스 역전사효소 검출 검사를 사용해야 합니다.

맞춤형 테스트 계획을 수립하세요

저희 전문가들은 귀사의 신약 개발 또는 상용 제품 요구 사항에 맞춰 레트로바이러스 테스트 계획을 설계해 드립니다.

결과 도출 시간 단축

즉시 사용 가능한 품질 보증 테스트 계획과 사전 검증된 cGMP 테스트를 통해 전문적인 테스트를 즉시 이용하고 더 빠른 결과를 얻을 수 있습니다.

레트로바이러스 데이터를 제출하기 쉽도록 올바른 위치에 배치하십시오.

저희 전문가들은 내인성 레트로바이러스를 함유하는 것으로 알려진 세포주에서 얻은 결과를 해석하여 제품 출시/규제 제출을 위한 방향을 제시합니다.

cGMP 규정 준수를 보장하십시오

당사의 cGMP 준수 분석법은 유럽 약전(EP) 및 미국 약전(USP) 지침을 따릅니다.

레트로바이러스 검사 전략을 수립하세요

전문가 상담 요청

시험 권장 사항은 제품 제조에 사용되는 세포주의 종류에 따라 달라집니다. 내인성 레트로바이러스를 함유하지 않는 것으로 알려진 세포주(인간 또는 영장류 세포주)는 일반적으로 투과전자현미경(TEM) 검사와 단백질 증강 역전사효소(PERT) 검사에서 음성 결과를 보여야 합니다. 내인성 레트로바이러스를 함유하고 있는 것으로 알려진 세포주(햄스터 세포주)는 투과전자현미경(TEM) 검사에서 양성 결과를 보이고 세포 기반 감염성 검사에서 음성 결과를 보여야 합니다. 시험 권장 사항은 제품의 용도(예: 재조합 단백질 생산, 백신 생산, 바이러스 백신, 바이러스 벡터 유전자 치료)에 따라서도 달라집니다.

바이러스 유사 입자(VLP)가 존재할 수 있지만, 감염성이 없다는 것이 입증되어야 합니다.


다음에서 샘플링됨

투과 전자 현미경(TEM)

제품 강화 역전사효소(PERT)

확장형 S+L 분석


연구 세포 은행

- 

- 

- 

마스터셀 뱅크

X 

X 

X* 

워킹 셀 뱅크

-

- 

X*

생산 종료 세포 은행

X 

X 

X* 


마스터 바이러스 종자 재고

X 

X 

- 

작업용 바이러스 종자 스톡

- 

X 

- 

정제되지 않은 대량 수확물

X 

X 

X* 

약물 물질

- 

- 

- 

의약품

- 

- 

- 

X* – murine-based cell lines only (e.g., - hamster) 

200개 세포 프로필 분석

주로 포유류 세포 은행에 사용되는 이 검사에서는 최소 200개의 중간 크기 세포(핵을 가진 세포)를 투과 전자 현미경(TEM)으로 관찰합니다. 세포의 주요 부분인 세포핵, 세포 소기관, 골지체 및 세포막을 자세히 검사합니다. 이 검사는 세포 형태가 온전하게 유지되는지 확인하는 데 목적이 있습니다. 또한 바이러스, 바이러스 유사 입자, 곰팡이, 효모, 박테리아 및 마이코플라스마를 식별하고 이러한 미생물이 검출된 세포 비율(%)을 기록합니다. 레트로바이러스가 검출된 경우, 바이러스 입자의 종류도 기록합니다. 이 검사는 제품에 대한 정량적 및 정성적 데이터를 제공하며, 제출 시 TEM 이미지를 함께 제공합니다.

박편

주로 대량 수확 시료에 사용되는 또 다른 방법은 박편 전자 현미경 검사입니다. 다이아몬드 칼과 마이크로톰을 사용하여 시험 물질의 초박편을 제작한 후 아세트산우라닐과 구연산납으로 염색합니다. 무작위로 선택한 10개의 격자에서 바이러스 입자 수를 세어 역가를 계산합니다.

음성 염색

음성 염색법은 생물 시료의 형태와 미세구조를 파악하기 위해 고배율 투과 전자 현미경(TEM) 연구를 가능하게 합니다. 전자 불투명 염색제를 현탁액 상태의 생물 시료에 직접 도포합니다. 염색제는 시료를 둘러싸고 침투하여 생물 물질과 배경 사이에 명암 대비를 생성합니다. 시료는 기준 물질로 알려진 농도의 라텍스 비드와 혼합되어 시료에 대한 바이러스 유사 입자의 역가를 측정할 수 있게 합니다.

전문가 상담 요청

FPERT

형광 생성물 증강 역전사효소(FPERT) 검사는 모든 레트로바이러스에 존재하는 RNA로부터 DNA를 전사하는 효소인 역전사효소의 활성을 측정하는 매우 민감한 검사입니다.

qPCR 기반 방법이기 때문에 TEM 및 세포 기반 방법보다 결과를 더 빠르게 얻을 수 있습니다.

전문가 상담 요청

S+L 분석

확장형 S+L 분석법은 MCB, WCB 또는 EoP 세포 은행 샘플에서 감염성 레트로바이러스의 존재 여부를 확인하는 한계 검사로, 감염성 마우스 레트로바이러스 검출이 필요한 경우(주로 CHO 세포 은행 또는 마우스 세포 은행 검사 시)에 사용됩니다.

세포는 Moloney MLV를 제외한 모든 4가지 유형의 생쥐 백혈병 바이러스(MLV) 감염을 지원할 수 있습니다. MiCl1 및 PG4 엔드포인트 세포주를 사용하면 이 분석법은 다양한 이종친화성 및 양성친화성 감염성 생쥐 레트로바이러스를 검출할 수 있습니다.

전문가 상담 요청

관련 자료

브로셔

cGMP 세포은행 제조 및 특성 분석

PDF | 1.2MB
다운로드

전문가 상담 요청

전문가 상담 요청

관련 콘텐츠

icon-yeast

미생물 오염물질

자세히 알아보기
icon-virus-b

종 특이적 바이러스

자세히 알아보기
icon-holding-flask

외래 병원체

자세히 알아보기