레트로바이러스 검사

레트로바이러스

레트로바이러스 테스트 요구사항 충족

레트로바이러스는 매우 복잡한 생명 주기를 가진 바이러스 계열입니다. 대부분, 혹은 모든 생산 세포주에 프로바이러스 형태로 내재되어 있기 때문에 특히 주목할 만합니다. 예를 들어, CHO 세포는 투과 전자 현미경(TEM)으로 관찰 가능한 바이러스 입자를 생성할 수 있는 내재성 바이러스를 가지고 있습니다. 이는 감염성이 없지만, NS0와 같은 일부 마우스 세포주는 감염성 레트로바이러스를 생성할 수 있습니다.

국제의약품규제조화위원회(ICH) 가이드라인(섹션 3.2.1)은 의약품 제조 공정의 세 단계에 적용되는 레트로바이러스 검사를 설명합니다: 마스터 세포 은행(MCB), 생산 종료(EOP) 세포 은행 및 대량 수확. 가이드라인에 설명된 검사에는 민감한 세포 배양에서의 감염성 분석 및 투과전자현미경(TEM) 연구가 포함됩니다. 감염성 레트로바이러스가 검출되지 않고 TEM으로 레트로바이러스 또는 레트로바이러스 유사 입자가 관찰되지 않은 경우에만 추가 검사가 필요합니다. 이 경우 레트로바이러스 역전사효소 검출을 위한 분석을 사용해야 합니다.

맞춤형 테스트 계획 수립

전문가들이 귀하의 의약품 개발 또는 상업용 제품 요구에 맞는 레트로바이러스 테스트 계획을 설계합니다

결과 도출 시간 단축

즉시 사용 가능한, 품질 보증된 테스트 계획 및 사전 검증된 cGMP 테스트로 전문 테스트 접근 및 신속한 결과 제공

레트로바이러스 데이터를 제출에 적합하게 배치

내재된 레트로바이러스를 포함하는 것으로 알려진 세포주의 결과를 전문가가 해석하여 제품 출시/규제 제출을 위한 방향 제시

cGMP 규정 준수 보장

유럽 약전(EP)과 미국 약전(USP) 가이드라인에 부합하는 cGMP 준수 검사

레트로바이러스 검사 전략 수립

전문가와 상담

제품을 제조하는 세포주의 종류에 따라 테스트 권장 사항이 달라집니다. 내재성 레트로바이러스를 포함하지 않는 것으로 알려진 세포주(인간 또는 영장류 세포주)는 일반적으로 음성 TEM 및 제품 강화 역전사효소(PERT) 결과를 보여야 합니다. 내재성 레트로바이러스를 포함하는 것으로 알려진 세포주(햄스터 세포주)는 양성 TEM 결과와 세포 기반 감염성 검사의 음성 결과를 보여야 합니다. 테스트 권장 사항은 제품의 의도된 용도(예: 재조합 단백질 생산, 백신 생산, 바이러스성 백신, 바이러스 벡터 유전자 치료)에 따라서도 달라집니다.

바이러스 유사 입자(VLP)가 존재할 수 있지만 비감염성임을 입증해야 합니다.


샘플링 출처

투과 전자 현미경(TEM)

제품 향상된 역전사효소 (PERT)

확장된 S+L 분석


연구 세포 은행

- 

- 

- 

마스터 세포 은행

X

X

X*

작업 세포 은행

-

- 

X*

생산 세포 은행 종료

X

X

X*


마스터 바이러스 시드 재고

X

X

- 

작업 바이러스 시드 재고

- 

X

- 

정제되지 않은 대량 수확

X

X

X*

약물 물질

- 

- 

- 

의약품

- 

- 

- 

X* – murine-based cell lines only (e.g., - hamster) 

200개 세포 프로파일 검사

이 테스트는 주로 포유류 세포 은행에 사용되며, 최소 200개의 중간 세포 프로파일(핵이 있는 세포)을 TEM으로 스크리닝합니다. 세포의 주요 부분 — 세포 핵, 세포 소기관, 골지체 및 세포막 — 을 면밀히 검사합니다. 이 분석은 세포 형태가 온전히 유지되는지 확인하고자 합니다. 또한 바이러스, 바이러스 유사 입자, 곰팡이, 효모, 박테리아 및 마이코플라스마를 식별하고, 이와 연관된 세포 프로파일의 비율을 기록합니다. 식별된 레트로바이러스의 경우, 바이러스 입자의 유형을 기록합니다. 이 분석은 제출용 TEM 시각화와 함께 제품에 대한 정량적 및 정성적 데이터를 제공합니다.

얇은 절편

대량 수확 준비를 위해 주로 사용되는 또 다른 방법은 얇은 단면 전자 현미경 검사입니다. 다이아몬드 나이프와 마이크로톰을 사용하여 시험 재료의 초박절편을 준비한 후 우라닐 아세테이트와 납 구연산염으로 염색합니다. 바이러스 입자를 10개의 무작위 격자 사각형에서 계산하고 역가를 계산합니다.

음성 염색법

음성 염색법은 생물학적 표본의 형태와 초미세 구조를 결정하기 위해 고배율 투과전자현미경(TEM) 연구를 가능하게 합니다. 전자 불투명 염색제를 현탁액 유체의 생물학적 샘플에 직접 적용합니다. 염색제가 표본을 둘러싸고 침투하여 생물학적 재료와 배경 사이의 대비를 만듭니다. 샘플은 참조용 알려진 농도의 라텍스 비즈와 혼합되어 샘플의 바이러스 유사 입자 역가를 생성할 수 있게 합니다.

전문가와 상담

FPERT

형광 제품 향상 역전사효소(FPERT) 분석은 RNA로부터 DNA를 전사하고 모든 레트로바이러스에 존재하는 효소인 역전사효소의 활성을 측정하는 고감도 검사입니다.

정량적 PCR 기반 방법으로, 결과를 TEM 및 세포 기반 방법보다 더 빠르게 생성할 수 있습니다.

전문가와 상담

S+L 분석

Extended S+L 분석법은 MCB, WCB 또는 EoP 세포 은행 샘플 내 감염성 레트로바이러스의 존재를 확인하기 위한 한계 검사로, 감염성 마우스 레트로바이러스 검출이 필요한 경우에 사용됩니다(주로 CHO 세포 은행 또는 마우스 세포 은행 테스트용).

이 세포들은 Moloney MLV를 제외한 모든 네 가지 클래스의 마우스 백혈병 바이러스(MLVs)의 감염을 지원할 수 있습니다. MiCl1과 PG4 엔드포인트 세포주를 사용하여, 이 분석법은 다양한 외인성 및 양성 감염성 마우스 레트로바이러스를 검출할 수 있습니다.

전문가와 상담

관련 자산

브로셔

cGMP 세포 은행 제조 및 특성 분석

PDF | 1.2 MB
다운로드

전문가와 상담

전문가와 상담

관련 콘텐츠

icon-yeast

미생물학적 오염 물질

더 알아보기
icon-virus-b

종 특이적 바이러스

더 알아보기
icon-holding-flask

우발적 병원체

더 알아보기