생물리학적 특성 분석

단백질 기반 치료제는 생세포에서 생산되어 본질적인 구조적 불균일성을 갖습니다. 고유한 구조적 불균일성을 특성화하는 것은 치료용 단클론항체 개발의 필수 요건입니다. 번역 후 수정은 생체 내 안정성, 생물학적 활성 상실, 원치 않는 면역 효과를 야기할 수 있습니다.

싸토리우스는 치료용 단백질 개발의 적절한 단계에서 단백질 구조 및 물리화학적 분석을 수행함으로써 이러한 위험을 완화하는 데 필요한 지원과 조언을 제공합니다. 우리는 ICH Q6B 과학 지침을 충족시키는 최첨단 기술을 사용하여 단백질 구조, 탄수화물 프로파일 및 번역 후 수정을 특성화하고 확인하는 포괄적인 방법 범위를 제공하여 효율적이고 간소화된 개발 프로세스를 보장합니다.

단백질 당화의 맞춤형 프로파일링

단백질의 모든 단계에서 글리코형을 평가하는 세 가지 방법을 제공합니다

전체론적 특성 분석

구조 및 물리화학적 특성 분석과 복잡한 생물학적 분석을 결합하여 단백질을 완전히 특성화합니다

즉시 사용 가능한 분석

표준 분자(IgG 등)의 경우, 신속한 배포를 위해 사전 검증된 분석 방법을 보유하고 있습니다

로트 출시 능력

초기 단계 클론 특성 분석부터 완전한 cGMP 규격 로트 출시까지 모든 단계에서 맞춤형 솔루션과 함께 파트너십을 제공할 수 있습니다

ICH Q6B 요구사항

우리의 솔루션

탄수화물 구조

  • 초기 단계 CLD를 위한 Cellca 세포주 개발이 포함된 랩칩 (풀에서 클론까지, 인라인)
  • 후기 단계 CLD를 위한 UHPLC로 방출된 N-글리칸 (최종 클론 선택)
  • LC/MS를 통한 N-당단백질 방출 및 심층 특성 분석

아미노산 서열

  • 단일 효소 소화를 통한 펩타이드 매핑, 95% 이상 커버리지
  • 다중 효소 소화를 통한 펩타이드 매핑, 100% 커버리지
  • 단백질 정체성의 예비 보증을 위한 무결 질량
Amino acid composition  

아미노산 분석

말단 아미노산 서열

펩타이드 매핑

펩타이드 지도 및 번역 후 수정

  • 펩타이드 매핑
  • 완전한 질량

황화수소기 및 이황화 가교

비환원 펩타이드 매핑


탄수화물 구조

단클론항체에 번역 후 공유결합된 당 구조의 존재와 풍부함은 분자 구조, 효과기 기능 및 안정성과 같은 여러 특성에 영향을 미치며, 항체 치료제 개발에 심각한 도전을 야기한다.

LC/MS에 의한 방출된 N-당화 분석

싸토리우스는 IgG 당화의 심층 프로파일링을 위한 출시된 N-당쇄 분석법을 제공합니다. 당쇄는 항체에서 효소적으로 제거된 후 표지되고, 이후 고해상도 액체 크로마토그래피(LC) 분리가 수행됩니다 (크로마토그램 그래픽 참조).

온라인 ESI 질량 분광법(MS)과 결합된 형광 검출은 다양한 당쇄 구조의 확신할 수 있는 할당과 정확한 정량을 가능하게 합니다. 이후 이들은 구조적 분류(예: 복합, 올리고만노스)와 단일당 조성에 따라 그룹화될 수 있으며, 푸코스, 갈락토스 및 시알산 프로파일과 같은 특성을 포함합니다.

크로마토그램은 가장 풍부한 GOF 피크를 100%로 설정하여 식별된 주요 당형을 보여줍니다.

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아미노산 서열 및 구성

펩타이드 매핑은 단백질의 1차 구조(아미노산 서열)를 확인하는 주요 기술입니다. 단백질은 단백질분해 효소를 사용하여 소화되며, 생성된 펩타이드는 액체 크로마토그래피-질량 분석법(LC-MS)으로 분석됩니다. 당사의 펩타이드 매핑 방법은 효율적인 소화 전략, 초고성능 LC 분리 및 고해상도 MS를 결합하여 단백질을 심층적으로 특성화합니다.

다중 소화 경로

일반적으로 트립신은 라이신과 아르기닌 잔기에 대한 높은 특이성 때문에 펩타이드 매핑을 위한 프로테아제로 사용됩니다. 그러나 트립신만으로 100% 서열 커버리지를 제공하지 못하거나 관심 단백질이 트립신 활성에 저항성이 있는 경우 다른 효소를 사용해야 할 수 있습니다.

펩타이드 매핑은 트립신과 직교적 특이성을 가진 다양한 단백질분해 효소를 사용하여 서로 다른 펩타이드 단편화 경로를 얻고 중복 펩타이드를 통해 서열 확인에 대한 추가 신뢰성을 확보할 수 있습니다.

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펩타이드 맵

단백질의 1차 구조를 구성하는 아미노산 서열을 확인할 때, 펩타이드 매핑은 선택의 방법입니다. 단백질을 단백질분해 효소로 소화시킨 후, 남은 펩타이드는 액체 크로마토그래피-질량 분석(LC-MS)을 위해 준비됩니다. 우리의 펩타이드 매핑 방법은 효율적인 소화 전략, 초고성능 LC 분리 및 심도 있는 단백질 특성 분석을 위한 고분해능 MS를 결합합니다.

번역 후 변형

펩타이드 매핑은 단백질 구조 분석의 중요한 부분을 차지하며, 다음과 같은 다양한 번역 후 변형(PTMs)의 분석적 특성화도 가능하게 합니다: 탈아미드화, 산화, N-말단 피로글루타민산, C-말단 라이신 절단 및 당화.

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디설파이드 결합을 환원하지 않고도 펩타이드 매핑을 수행하여 디설파이드 브리지 및/또는 자유 티올(황화수소기)의 위치를 확인할 수 있습니다.

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