친화력과 그 너머: 신속하고 정확한 생체분자 정제

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신속한 항체 및 His-태그 단백질 정제를 위한 친화성 크로마토그래피 솔루션

친화성 크로마토그래피(AC)는 생명과학 연구실 및 바이오의약품 산업에서 생물학적 물질을 정제하는 중요한 단계입니다. 특히 친화성 리간드와의 특정 상호작용을 기반으로 항체 및 His-태그 단백질 시료에서 주요 오염물질을 단일 단계로 제거하는 데 유용합니다.

스크리닝, 예비 정제 및 기타 연구 응용 분야를 위해, Sartobind®️ IDA 및 차세대 Rapid A 멤브레인은 워크플로우 단계를 줄이고 설정 시간을 최소화하며 간단하고 유연하며 고도로 선택적인 정제를 보장하는 즉시 사용 가능한 시린지 필터 형식으로 제공됩니다.

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Sartobind Lab chromatography unit beauty shot on a yellow background

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친화성 크로마토그래피와 그 응용

친화성 크로마토그래피의 원리

Sartobind® 랩 유닛의 친화성 크로마토그래피 멤브레인을 통해 세포 배양 상층액과 같은 복합 혼합물을 적용할 때, 대류 물질 전달은 관심 분자(MOI)를 효율적으로 포착하는 반면, 숙주 세포 단백질(HCPs)과 DNA와 같은 불순물은 멤브레인을 통과합니다. 순도를 높이기 위해 세정 단계를 사용할 수 있으며, 이후 MOI를 용출합니다.

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항체 정제

프로테인 A는 포도상구균에서 유래된 박테리아 세포벽 단백질입니다. 이 단백질은 단일클론항체를 포함한 면역글로불린 G 항체의 Fc 영역에 대해 높은 친화력을 가집니다.

크로마토그래피 매트릭스에 고정화되었을 때, 단백질 A는 세포 배양 상층액 또는 혈청 샘플과 같은 복잡한 혼합물로부터 항체를 선택적으로 포집할 수 있게 합니다. 이 방법은 면역분석에서 치료용 항체 생산에 이르기까지 다양한 응용 분야에 사용될 수 있는 고순도 항체 샘플을 제공합니다.

His-태그 단백질 정제

이가 금속 이온은 히스티딘 잔기에 특히 높은 친화력을 가집니다. 연구 실험실에서는 재조합 단백질을 일반적으로 N- 또는 C-말단에 폴리히스티딘 태그를 달아 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피(IMAC)를 통해 선택적으로 포집할 수 있게 합니다.

재현성, 선택성 및 온화한 용출 조건으로 인해, 이 방법은 구조 및 기능 연구를 위해 순수하고 원래 상태의 단백질 샘플을 생성하는 단일 단계 정제 과정을 단순화할 수 있습니다.

실험실 여과 및 정제 리소스

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친화성 크로마토그래피 리소스

Sartobind Lab being connected to a chromatography system
사례 연구

항체 정제의 비용 효율성 개선

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항체 정제 과정의 발전을 위한 필수 실험실 장비

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mAb 포집의 속도와 일관성 제공

응용 노트 접근

자주 묻는 질문

친화성 크로마토그래피는 선택된 리간드와 생체분자의 특정 상호작용을 기반으로 합니다. 항체 및 기타 Fc 포함 분자(프로테인 A) 또는 히스-태그가 있는 엔지니어링된 단백질의 포획 정제에 사용될 수 있습니다.

Sartobind®️ IDA 랩은 환경 샘플에서 이가 금속 이온을 포획하거나 제거하는 데 사용될 수도 있습니다.

Sartobind® 랩은 현재 프로테인 A 또는 이미노디아세트산(IDA) 리간드와 함께 제공됩니다.

친화성 크로마토그래피는 선택된 리간드와 생체분자 간의 특정 상호작용을 기반으로 합니다. 항체(Protein A) 또는 히스-태그가 있는 단백질의 포획 정제에 사용될 수 있습니다.

Sartobind® IDA Lab은 환경 샘플에서 이가 금속 이온을 포획하거나 제거하는 데에도 사용될 수 있습니다.

하나 또는 네 개의 유닛, Luer to UNF 어댑터 한 쌍, 그리고 빠른 시작 가이드입니다.

두 개의 유닛, Luer to UNF 어댑터 한 쌍, 그리고 빠른 시작 가이드입니다.

네, 그렇습니다. 제품 포장의 빠른 시작 가이드로 환경 영향을 최소화하기 위한 조치를 취했지만, 제품 사용에 대한 자세한 정보가 필요하다면 전자 상점의 해당 제품 페이지에서 전체 사용 설명서를 다운로드할 수 있습니다.

두 멤브레인 크로마토그래피 장치는 장비 없이 또는 장비와 함께 사용할 수 있습니다. 빠른 정제와 최소한의 설치 시간을 위해 주사기나 장치를 루어 잠금 입구에 직접 연결할 수 있습니다.

베드 볼륨은 멤브레인 볼륨(MV)으로도 불립니다.

  • Sartobind® Rapid A Lab: 0.5 mL
  • Sartobind® IDA 랩: 2.1 mL

이러한 크로마토그래피 장치는 대부분의 일반적인 정제 버퍼에서 안정적입니다. 산화제는 피해야 합니다.

수지 크로마토그래피와 달리, Sartobind® 멤브레인에는 공기 방울이 방해할 가능성이 없습니다. 이는 버퍼를 탈기할 필요성을 제거하여 상당한 준비 시간을 절약합니다.

최적의 생체분자 포집을 위해 정제할 샘플과 유사한 조성의 버퍼로 평형화할 것을 권장합니다. 이는 신속한 과정으로 정제 주기에 단 몇 초만 추가됩니다.

Sartobind® 멤브레인은 막힘에 대해 저항성이 있지만, 모든 샘플을 로딩 전에 사전 여과할 것을 권장합니다. 생산성을 최대화하기 위해 동시 사전 여과 및 샘플 로딩을 위해 Sartobind® 랩 입구에 장치를 연결할 수 있습니다.

분자 최적 포집 조건을 알 수 없는 경우, 멤브레인에 로딩된 다양한 금속 이온으로 스크리닝할 것을 권장합니다. 제안된 금속 이온에는 니켈(Ni2+), 코발트(Co2+), 구리(Cu2+) 및 아연(Zn2+)이 포함됩니다.

스카우팅 정제는 최적의 세척 및 용출 조건을 결정하기 위해 수행될 수도 있습니다. 원심분리기, 주사기 또는 펌프로 정제할 때는 점진적으로 증가하는 이미다졸 농도의 버퍼를 사용하여 다단계 용출을 수행하십시오. 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하는 경우, 선형 용출 경사를 적용하십시오. 그런 다음 적절한 방법(예: SDS PAGE)을 사용하여 흐름 유출 및 용출 분획을 분석하고 필요한 순도 수준을 제공하는 조건을 식별해야 합니다.

각 Sartobind® 랩 장치는 적절한 재생 및 보관으로 여러 번 재사용할 수 있습니다. Sartobind® IDA 랩 장치의 결합 용량을 유지하려면 킬레이트된 금속 이온의 정기적인 제거 및 재적재를 권장합니다.

각 목표 생체분자에 대해 별도의 Sartobind® 랩 장치를 사용하는 것을 권장합니다. 이는 캐리오버 위험을 제거하기 위함입니다.

Sartobind® Rapid A Lab은 이미 사이클당 ≥17.5 mg의 높은 동적 결합 용량을 가지고 있습니다.

더 많은 양을 정제하려면 두 장치를 직렬로 연결할 수 있습니다. 또는 여러 번의 작은 로드로 여러 사이클에 걸쳐 단일 장치로 높은 유량의 장점을 최대한 활용할 수 있습니다.

네, 있습니다. Sartobind® Rapid A Lab은 다른 모든 Sartobind® Lab 유닛과 마찬가지로 100% 재생 에너지원을 사용하여 제조될 뿐만 아니라, 최대 100회 재사용할 수 있어 소모품 수를 줄이고 연구 폐기물을 줄일 잠재력이 있습니다. 또한, 다른 단백질 A 수지 컬럼 및 막 크로마토그래피 유닛과 달리 Sartobind® Rapid A Lab은 상온에서 보관할 수 있어 에너지 집약적인 냉각의 필요성을 줄일 수 있습니다.

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