immunocytochemistry

Incucyte 실시간 세포 면역세포화학

실시간 세포 면역세포화학염색

면역세포화학염색의 새로운 접근법으로 표면 단백질 발현 동역학 규명

면역세포화학염색(ICC)은 단백질 위치, 이동 경로 및 단백질-단백질 상호작용을 시각화하는 중요한 세포 이미징 기법입니다. 특수 현미경을 사용하면 연구자들은 나노미터 해상도로 표지된 세포 구조를 관찰할 수 있습니다.

그러나 세포가 분화하거나, 상호작용하거나, 외부 자극에 반응할 때 발생할 수 있는 단백질 분포와 발현의 변화를 연구하는 것은 더욱 어렵습니다.

비방해성 Incucyte Fabfluor-488 및 Incucyte Fabfluor-594 항체 라벨링 염료를 활용하는 새로운 Incucyte 실시간 세포 면역세포화학 단백질 검출 기법을 통해, 이제 기존의 면역세포화학 프로토콜을 보완하고 표면 단백질 발현 동역학에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있습니다.

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백서: 실시간 세포 면역세포화학

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어플리케이션

Incucyte 실시간 세포 면역세포화학 소개

Incucyte 실시간 세포 면역세포화학 분석은 자동 이미징 및 분석의 강점을 간단한 항체 라벨링 접근법과 결합하여 조직 배양 배양기 내에서 표면 단백질 발현의 동역학적, 이미지 기반 측정을 생성합니다.

실시간 세포 면역세포화학은 세포 기능 및 형태와 연계될 수 있는 세포 표면 단백질 표지자의 장기 추적 및 정량을 위한 강력한 솔루션을 제공합니다.

주요 장점

Incucyte 실시간 세포 분석 시스템, Incucyte Fabfluor-488 및 Incucyte Fabfluor-594 항체 라벨링 염료는 96 및 384웰 형식에서 세포 표면 단백질 발현 및 분포의 장기 동적 변화를 정량화하기 위한 턴키 솔루션을 제공하여 더 빠르게 의미 있는 결과를 도출할 수 있습니다.

  • - 비간섭 항체 라벨링 시약을 사용하여 시간에 따른 단백질 발현 및 분포 측정 —
  • - 최대 6개의 96웰 플레이트에서 병렬로 이미지를 자동 획득 및 분석하는 신속하고 단일 단계의 라벨링으로 더 빠르게 답 도출
  • - 세포 기능 및 형태와 연관된 표면 단백질 발현 변화를 분석하여 세포 행동의 정보성 있는 시간적 변화를 밝혀냅니다.
  • - 복잡한 공동배양 모델에서 세포 간 상호작용을 시각화하고 정량화하여 세포 간 상호작용에 대한 통찰력을 제공합니다.

추가 정보 요청

세포 표면 단백질 발현 동태 정량화

종양의 면역세포 신호전달 경로 조절에 대한 추가 통찰력을 제공하기 위해 염증 자극에 대한 세포 표면 단백질의 동적 변화 측정

(오른쪽). Incucyte Nuclight Red MDA-MB-231 (유방) 또는 SKOV-3 (난소) 암세포를 Incucyte Fabfluor-488-α-PD-L1 항체 복합체와 Incucyte Opti-Green 배경 억제제 존재 하에 IFNγ와 함께 배양했습니다. 녹색 형광 영역의 정량화 결과, IFNγ가 MDA-MB-231 세포에서 시간 및 농도 의존적으로 PD-L1 발현을 증가시킴을 보여줍니다. 시간 경과 프로파일은 MDA-MB-231(고발현) 및 SKOV-3(중간발현) 세포의 차별적 PD-L1 발현을 나타냅니다.

생산성을 높이세요

최대 6개의 96웰 플레이트에서 이미지를 신속하고 단일 단계로 라벨링하고, 자동 획득 및 분석을 통해 더 빠르게 답을 얻으세요.

단백질 발현 동역학과 형태 및 기능 연계

실시간으로 단백질 양과 분포의 장기 변화를 형태 및 기능 변화와 쉽게 연계

(오른쪽). THP-1 단핵구를 배지(미분화), 비타민 D3 또는 PMA에 Incucyte Fabfluor-488 항체 복합체와 함께 CD11b, CD14 또는 CD40에 노출시켰습니다. PMA는 배지 단독 또는 비타민 D3 처리 세포와 비교하여 세포 형태에서 현저한 변화를 보였습니다(HD-위상차 이미지). 동역학 그래프는 다양한 처리에 대한 차별적이고 시간 의존적인 표면 단백질 발현을 강조합니다. 흥미롭게도 PMA는 배지 또는 비타민 D3와 달리 세포 증식(밀집도) 감소와 동시에 Incucyte용 pHrodo Red 세포 라벨링 키트로 표지된 사멸 Jurkat 세포의 사멸세포 제거를 통해 측정된 식세포 잠재력 증가를 산출합니다.

세포-세포 상호작용 연구로 더 깊은 통찰력 도출

세포 표면 단백질 발현 표지자를 통해 세포-세포 상호작용 관찰 및 정량화하여 복잡한 공동배양 모델에 대한 통찰력 제공

. Incucyte Cytolight Red A549 종양세포를 Incucyte Fabfluor-488-α-CD45 및 Incucyte Opti-Green과 함께 사전 활성화되거나 비활성화된 PBMC와 혼합했습니다. PBMC 추가 2시간 후 이미지는 CD45+ 세포(녹색)와 A549 세포(빨간색) 간 상호작용을 보여줍니다. 상호작용 정량화(오버레이, 이미지의 노란색 마스크)는 활성화된 작동세포와 표적세포 간 상호작용의 현저한 증가를 나타내며, 종양세포의 면역학적 제거를 위한 세포 결합을 보여줍니다(막대 그래프 참조).

Incucyte Nuclight Red A549 폐암세포를 인간 말초혈액단핵구(PBMCs)와 함께 Incucyte Fabfluor-488 표지 CD8 항체 존재 하에 배양했습니다. CD3/IL-2로 PBMCs 활성화는 PBMCs와 종양세포 간 상호작용을 증가시켰습니다. Incucyte Fabfluor-488-CD8로 면역세포 표지는 극성을 확인했으며, 여기서 PBMC의 CD8+ 영역이 A549 종양세포와 접촉하는 것으로 나타났습니다.

밸리데이션 데이터

비방해성, 특이적 장기 표지 시약 검증

Incucyte Fabfluor-488 염료는 비방해성이며 수 시간 또는 수일에 걸쳐 생세포의 표면 단백질 동역학을 강력하게 분석할 수 있는 특이적 장기 표지를 생성합니다

. HT-1080 세포를 Incucyte Fabfluor-594로 표지된 α-CD71 존재 하에 배양하면 적색 형광을 나타내며, Incucyte Fabfluor-594 IgG 동형 대조군으로 배양된 세포는 세포 형광을 나타내지 않습니다. Incucyte Opti-Green 또는 Incucyte Fabfluor-594로 표지된 항체 추가는 2일 동안 세포 성장에 영향을 미치지 않았습니다 (A). 표지된 CD71로 처리된 세포만 시간에 따른 적색 객체 영역 증가를 보이며 (B), 세포 영역으로 정규화하면 CD71의 일정한 발현을 보여줍니다 (C).

혼합 세포 집단을 식별하고 정량화하기 위한 특정 항원 검출

시간에 따른 단백질 발현 변화를 식별하는 특정 표면 마커로 복잡한 공동배양 모델을 평가하고 세포 상호작용을 특성화합니다.

Ramos (B세포 유사) 세포는 Incucyte Opti-Green 존재 하에 다양한 Incucyte Fabfluor-488 표지 항체와 함께 배양되었습니다. 비특이적(CD45) 및 특이적(CD20) B세포 표지자를 이용한 장기 라벨링이 관찰되었습니다. T세포 표지자(CD3) 또는 동형접합체 대조 항체에서는 형광 신호가 관찰되지 않았습니다. Ramos와 Jurkat(T세포 유사) 세포를 고정된 비율로 혼합했을 때, 예상된 CD20 염색 수준이 측정되어 혼합 배양에서의 유용성을 입증했습니다.

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Incucyte Fabfluor-488 항체 라벨링 염료

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Incucyte Fabfluor-594 항체 라벨링 염료

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포스터: AAI 2018

형광 Fab/Ab로 생세포 표면 표지자 및 세포 집단 추적

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자주 묻는 질문

예. 다양한 항체를 사용하여 여러 세포 유형(예: 라모스, 라지, 저크캣)과 일차세포(예: PBMC)에서 항체 내재화를 측정했습니다. 표적 특이적 내재화의 경우, 항체 흡수 정도와 속도는 세포 표면의 항원(수용체) 발현 수준 및 항체의 결합 특성을 포함한 다양한 변수에 따라 달라집니다.

해당 Fc 영역이 있는 항체만 우리의 접근법과 호환됩니다. Fc 사슬이 없는 항체 단편은 작동할 것으로 예상되지 않습니다.

예, 세포 수로 정규화하고 각 시간 경과에 대한 최대 반응을 결정함으로써 반응 속도를 추정할 수 있습니다. 자세한 내용은 현지 현장 응용 과학자에게 문의하시기 바랍니다.

예, 세포 건강 시약과 같이 나머지 가용 채널에서 다른 판독값과 이 분석법을 다중화하는 것이 가능합니다.

이 방법은 표적 매개 항체 내재화와 음세포작용(비특이적) 흡수를 측정하는 데 적합합니다. Incucyte Fabfluor-pH 염료가 검사 항체의 Fc에 결합하므로 표적 특이적 항체-항원 상호작용을 방해하지 않을 것으로 예상됩니다. Fc 결합에 의존하는 특정 항체 흡수 및 재순환 메커니즘(예: FcR 및 FcRn)은 Incucyte Fabfluor-pH 염료의 결합 상호작용에 의해 복잡해질 수 있습니다.

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