실시간 세포 NETosis 분석

개요

실시간 호중구 세포외 덫 정량화

호중구는 감염 부위에서 선천성 면역 시스템의 첫 방어선으로, NETosis라고 알려진 특정 형태의 프로그램된 호중구 세포사를 통해 호중구 세포외 덫(NETs) 방출을 포함한 여러 전략으로 미생물을 분해하고 제거합니다. NETs는 항균 단백질과 DNA로 구성된 그물 구조로, 병원체를 포획하고 분해하는 숙주 방어 전략이지만 류마티스 관절염을 포함한 다양한 자가면역질환 및 병리학적 상태와 연관되어 있습니다.

당사의 전략

Incucyte 실시간 세포 이미징 시스템과 Incucyte Cytotox 녹색 시약을 사용하면 실시간으로 NETosis를 진행하는 호중구를 자동으로 정량화할 수 있습니다. Incucyte 실시간 세포 시약 및 분석을 통해 핵의 부종 및 탈응축, 이어서 NET 방출의 NETosis 단계를 관찰하고 측정할 수 있습니다.

NETosis 분석

Incucyte NETosis 분석 소개

조직 배양 배양기 내부에서 실시간으로, 96웰 형식으로 NETosis를 자동으로 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션.

PMA로 처리된 인간 호중구의 NETosis 실시간 검출(좌측). 실시간 세포 분석 시스템을 사용하여 IncuCyte Cytotox 녹색 시약으로 녹색으로 표지된 NETosis 과정의 호중구를 정량화합니다.

주요 장점

  • - IncuCyte 실시간 세포 분석은 NETosis와 관련된 고유한 형태학적 변화를 검증할 수 있으며, 다엽핵의 소실, 핵 탈응축, 막 손상을 실시간으로 추적할 수 있습니다.
  • - 세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 치료 효과의 시기와 방법 결정 - 민감한 세포에 이상적
  • ; 세척, 고정, 리프팅 불필요 - IncuCyte Cytotox Green 시약의 믹스-앤-리드 방식을 활용하여 세포외 DNA 방출 및 형광 증강을 신속하게 시각화 및 정량화
  • - Incucyte 아넥신 V 레드 시약을 사이토톡스 그린 시약과 결합하여 다중 측정 - 세포자멸사와 NETosis를 쉽게 구별

NETosis를 실시간 이미징으로 검증

Incucyte 실시간 세포 분석을 통해 NETosis와 관련된 고유한 형태학적 변화 검증 - 다엽 핵의 소실, 핵 탈응축, 막 손상을 실시간으로 추적

PMA로 자극된 IncuCyte 이미지는 DMSO(1.25% v/v) 및 ATRA(0.1 µM)로 분화된 HL-60 세포를 IncuCyte Cytotox Green 시약과 함께 보여줍니다. 자극 후 약 2시간 경과 시점에 핵의 특징적인 탈응축을 확인할 수 있습니다. 세포질이 핵질과 혼합됨에 따라 위상 이미지에서 더 이상 핵이 보이지 않습니다. 핵 내용물이 세포막으로 이동하여 방출되며, 외부 DNA가 IncuCyte Cytotox Green 시약에 결합하여 형광 증강(녹색)이 관찰됩니다.

IncuCyte Cytotox Green을 사용한 전체 분석 시간 과정에 대한 자동화된 분석

세포를 배양기의 안정적인 환경에서 제거하지 않고 처리 효과가 언제 어떻게 발생했는지 확인 - 민감한 세포에 이상적임

IncuCyte NETosis 분석은 96웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징 및 분석(형광 이미지)하여 시간에 따른 호중구 생리학의 동역학적 판독을 제공할 수 있습니다(왼쪽 그래프). 통합된 Incucyte 기본 분석 소프트웨어의 영역 필터(오른쪽 그래프, 300 µm2 미만 객체 제외)를 사용하면 세포자멸사(CMP 처리, 더 작은 라벨 세포, 생존력 상실 시 핵만 형광) 및 NETosis(PMA 처리, 핵 내용물이 세포막으로 이동 및 방출되며 외부 DNA가 라벨링됨) 유도 처리를 구별할 수 있습니다.

약리학적 스크리닝에 적합한 간단한 혼합 및 판독 96웰 프로토콜; 세척, 고정, 리프팅 불필요

혼합 및 판독 IncuCyte Cytotox Green 시약을 활용하여 세포외 DNA가 방출되고 형광이 증강됨에 따라 NETosis를 신속하게 시각화 및 정량화합니다.

Incucyte Cytotox Green을 사용하여 전체 분석 시간 과정에 걸친 자동화된 분석

HL-60 세포를 NADPH 산화효소 억제제인 디페닐렌 요오도늄(DPI)의 농도를 증가시키며 처리했습니다. 세포를 PMA로 자극하고 간단한 혼합-판독 프로토콜을 사용하여 Incucyte Cytotox green으로 표지했습니다. 시간 경과 그래프는 DPI의 농도 증가에 따라 억제되는 100 nM PMA로 시간에 따른 총 녹색 객체 영역의 증가를 보여줍니다(A); IncuCyte에서 촬영한 플레이트 뷰는 각 억제제의 농도 의존적 반응(억제제당, 농도당 n=3)과 함께 명확한 양성 및 음성 대조군 반응(H행)을 보여줍니다(B); 곡선하 면적 분석을 통해 명확한 농도 의존적 반응을 표시할 수 있습니다(C).

세포자멸사 판독과의 다중화로 메커니즘적 통찰 가능

Incucyte Annexin V Red 시약을 Incucyte Cytotox Green 시약과 결합하여 다중 측정 - 세포자멸사와 NETosis를 쉽게 구별.

PMA 또는 이오노마이신으로 자극된 세포를 Incucyte Cytotox Green 시약(NETosis - 밝은 형광, 큰 객체 영역) 또는 Incucyte Annexin V Red(PS 외재화 - 낮은 형광)로 라벨링하여 차별적 호중구 세포사를 검출합니다.

주문 정보

Incucyte Cytotox Green 및 Annexin V Red 시약은 Incucyte 실시간 세포 분석 시스템과 함께 사용하기 위해 완전히 검증되었으며, 동일한 웰 내에서 NETosis와 세포자멸사의 다중 측정을 위해 결합될 수 있습니다.

제품

수량

카탈로그 번호

세포 사멸 세포 계수용 Incucyte 세포독성 녹색 시약® 

5 μL x 5

4633

Incucyte 아넥신 V 적색 시약 (세포자멸사용)®

100회 시험

4641


기술 자료

문헌 및 문서

브로셔

Incucyte 시약, 소모품 및 소프트웨어

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프로토콜 — Incucyte NETosis 분석

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브로셔 — 면역학 연구를 위한 분석

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포스터 — 호중구 세포외 덫의 실시간 시각화 및 정량화

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관련 어플리케이션

apoptosis

세포자멸사

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cytotoxicity assays

세포독성

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주화성

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식균작용

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인간 호중구의 NETosis를 정량화하고 세포사 메커니즘을 구분하는 고처리량 실시간 이미징 기법

. Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. , 200: 869-879, 2017

“The Incucyte platform is a novel real-time assay that quantifies NETosis in a rapid, automated, and reproducible way, significantly optimizing the study of neutrophils. This platform is a powerful tool to assess neutrophil physiology and NETosis, as well as to swiftly develop and test novel neutrophil targets.”

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