Incucyte 면역세포 살해 분석

(1) 작은 세포독성 T세포와 더 큰 표지된 종양세포(적색) 사이의 물리적 접촉. T림프구 분열. (2) 세포독성 T림프구의 공격을 받는 종양세포: '죽음의 키스'. (3) 카스파제 3/7 라벨링(녹색), 핵 응축 및 세포사가 즉시 뒤따르는 종양세포 세포질 과립화. (4) 종양세포 분열: 한 세포가 두 세포로 나뉨.

Cytolight Red A549 종양세포를 Incucyte Fabfluor-488-α-CD45 및 Incucyte Opti-Green와 함께 사전 활성화되거나 비활성화된 PBMC와 혼합했습니다. PBMC 추가 2시간 후 이미지는 CD45+ 세포(녹색)와 A549 세포(적색) 간 상호작용을 보여줍니다. 상호작용 정량화(오버레이, 이미지의 노란색 마스크)는 활성화된 작동세포와 표적세포 간 상호작용의 현저한 증가를 나타내며, 이는 종양세포의 면역 살해를 위한 세포 결합을 나타냅니다(막대 그래프에 표시). 이 분석은 Incucyte 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 수행되었습니다.

Incucyte Nuclight NIR 렌티바이러스로 형질전환된 A549 세포를 Incucyte 아넥신 V 오렌지 시약, Incucyte Fabfluor-488-α-CD45 항체 복합체 및 Incucyte Opti-Green 배경 억제제 존재 하에 활성화(상단 행) 또는 비활성화(하단 행) PBMCs와 함께 공배양했습니다. NIR(파란색) 핵의 정량화는 표적세포 증식을, 오렌지 형광 영역(아넥신 V)은 표적세포 사멸을 나타냅니다. Incucyte 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 종양세포 존재 시 총 작동세포 수를 무표지 방식으로 정량화할 수 있습니다. Fabfluor-CD45 추가로 >80%가 CD45 양성 면역세포임을 보여줍니다.

Incucyte Nuclight 오렌지 렌티바이러스 시약으로 형질전환된 Ramos 세포를 Incucyte Annexin V NIR 시약, Incucyte Fabfluor-488-α-CD8 항체 복합체 및 Incucyte Opti-Green 배경 억제제 존재 하에 활성화 또는 비활성화(CD3/IL2 사용) PBMC와 공동 배양했습니다. 오렌지(빨간색) 핵의 정량화는 표적 세포 증식을 나타내고 NIR(파란색) 형광 영역은 표적 세포 사멸을 나타냅니다. Incucyte 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 총 표적 및 작동 세포 수, 표적 세포의 세포자멸사 지수를 시간에 따라 정량화하고 그래프로 나타낼 수 있습니다.

HER2 양성 SKOV-3 Nuclight Red 스페로이드(2.5K/웰)를 PBMCs(6.25K/웰)와 함께 파종하고 Herceptin(HER2 수용체 표적 단일클론항체)으로 처리한 후 10일 동안 이미징(A). Herceptin에 의한 SKOV-3 스페로이드 성장 억제를 형광 강도로 평가(B)

PBMCs를 HER2 양성 SKOV-3 Nuclight Red 또는 HER2 음성 A549 NucLight Red 종양세포와 공동 배양했습니다. SKOV-3 세포(A)에서 트라스투주맙 유도 농도 의존적 종양세포 증식 억제의 시간 경과, A549 세포(B)에서는 해당되지 않음. SKOV-3 세포의 증식 억제를 위한 트라스투주맙의 농도-반응 곡선(C). 항체 존재 및 부재 시 처리되지 않은(상단) 및 마스킹된(하단) 이미지 예시 (항체 첨가 72시간 후, D).