Vivapure® S 이온 교환 멤브레인 흡착제를 이용한 식물 캘러스로부터 페록시다아제의 신속한 분획 – 응용 노트

이온 교환 크로마토그래피는 단백질 생화학에서 가장 많이 사용되는 기술 중 하나입니다. 그러나 다중 샘플 분석 도구로서, 필요한 속도와 성능을 제공하는 상업적으로 이용 가능한 장치가 부족했습니다. 최근 우리 연구실은 포도 캘러스의 40 kDa 염기성 과산화효소에 관심을 가졌는데, 이는 병원체 침입에 대한 세포벽 방어에서 중요한 역할을 합니다. 캘러스 배양에서 낮은 수율로 인해 이 과산화효소에 대한 상세한 연구가 제한되었으며, 소량만 정제할 수 있었습니다.

우리는 이 과산화효소를 더 높은 수준으로 분비하는 캘러스 배양을 식별하여 이 분자를 대규모로 정제하는 데 더 편리한 조직 공급원로 사용하고자 합니다. 따라서 양이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 이 과산화효소를 다른 세포벽 과산화효소로부터 분리하고, 이후 SDS-PAGE와 과산화효소 활성 측정을 통해 다양한 캘러스 배양에서 그 양을 정량하고자 합니다.

우리의 초기 검사는 기존의 SP-Sepharose 컬럼 크로마토그래피를 사용했습니다. 그러나 이 기술은 시간이 많이 소요되었고 하루에 처리할 수 있는 샘플이 매우 적었습니다. 또한 저용량 샘플의 분획에 적합하지 않아, 대신 술폰산 기반 수지로 배치 정제를 시도했습니다. 이 경우 목표 단백질의 높은 회수율을 위해 수지를 광범위하게 세척해야 했고, 결과적으로 샘플이 희석되었습니다.

이 응용 노트는 Plant Biochemistry, ITQB NOVA, Oeiras와의 협력으로 작성되었습니다.

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