개요

통합 영상 획득 및 분석을 통해 세포 생존 여부 또는 분화 상태를 식별하고, 표지 시약으로 인해 발생할 수 있는 인공물을 줄여 생물학적 통찰력을 향상시킵니다.

형태가 다양한 6가지 세포 유형에 걸쳐, 캠토테신(CMP, 0.1 – 10 µM), 스타우로스포린(STP, 1 – 1000 nM), 시스플라틴(CIS, 0.5 – 50 µM)을 다양한 농도로 처리하고 Incucyte^® Annexin V 시약을 사용하여 라벨 없는 생사 판별 분석을 수행했습니다. 이미지는 Incucyte^® Adherent Cell-by-Cell Analysis Software Module을 사용하여 획득 및 분할했으며, 사멸 세포는 고급 라벨 없는 분류와 형광 분류(Annexin V)를 모두 사용하여 정량화했습니다. 이미지는 CMP로 처리한 A549 세포, STP로 처리한 HeLa 세포, CIS로 처리한 HT1080 세포의 생사 형태를 보여줍니다. 고급 라벨 없는 분류 시간 경과는 72시간 동안 사멸 세포 비율의 증가를 보여주고, Annexin V 시간 경과는 72시간 동안 Annexin V 양성 세포 비율의 증가를 보여줍니다. 두 방법의 시간 경과 및 농도 반응 곡선은 유사합니다.

세포 분화의 무표지 분류를 위한 강력하고 특수 설계된 소프트웨어를 사용하여 재현 가능한 실험 결과를 얻으십시오.

THP-1 단핵구를 사용하여 라벨 없는 분화 분석을 수행했습니다. 이 세포들은 Fabfluor-488로 표지된 CD11b(대식세포 마커) 존재 하에 PMA(100 nM)를 이용하여 대식세포 표현형으로 분화되었습니다. 이미지는 Incucyte^® 부착 세포별 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 획득 및 분할되었으며, 대식세포는 고급 라벨 없는 분류법과 형광 분류법(CD11b)을 모두 사용하여 정량화되었습니다. 위상 HD 및 형광 혼합 이미지는 세포가 단핵구에서 대식세포로 분화됨에 따라 형태 변화와 CD11b 발현(녹색 형광) 증가를 보여줍니다. 대식세포 비율의 시간 경과는 시간이 지남에 따라 분화된 세포의 증가를 나타내며, 형태 변화는 CD11b 발현 증가보다 약간 먼저 나타납니다(0~24시간). 두 가지 방법 모두에서 분화는 48시간 후 최대 80%의 대식세포 집단에서 안정화되었습니다.

96웰 및 384웰 포맷에서 이미지 기반 세포 형태 분석에 머신러닝을 활용하여 처리량을 크게 향상시키세요.

고급 라벨 프리 분류(Advanced Label-free Classification) 기법을 사용하여 세포독성 물질을 식별했습니다. 96웰 플레이트에서 다양한 작용 기전을 가진 14가지 화합물을 세포에 처리했으며, 세포 사멸을 유도하는 것으로 알려진 CMP(10 µM)를 대조군으로 사용했습니다. 고급 라벨 프리 분류 기법을 이용하여 사멸 세포 비율을 정량화했습니다. 96웰 플레이트의 딥 뷰(Deep View)는 처리 후 72시간 경과 시점의 생존 세포(녹색)와 사멸 세포(빨간색) 분류 마스크를 보여주어, 어떤 화합물과 농도가 세포독성을 나타내는지 빠르게 파악할 수 있도록 합니다.

A549 세포에 다양한 농도의 CMP(0.1~10 µM)를 처리하여 세포 사멸을 유도했습니다. 사멸 세포 비율은 전체 형태에 대한 Advanced Label-free Classification(다변량 분석, 왼쪽) 또는 세포 원형도를 나타내는 단일 지표(단변량 분석, 오른쪽)를 사용하여 정량화했습니다. 시간 경과 그래프는 각 방법에 따른 사멸 세포 비율을 보여줍니다. Advanced Label-free Classification은 예상대로 시간 및 농도에 따라 세포 사멸이 증가하는 양상을 보였으며, 이러한 시간 경과는 Annexin V 검증 연구 결과와 유사합니다. 세포 원형도에 대한 단변량 분석은 72시간 후 사멸 세포 비율이 농도에 따라 증가하는 것을 보여주지만, 대조군에서는 높은 수준의 세포 사멸이 관찰되었고 이는 시간에 따라 변화했습니다. 그러나 이러한 결과는 이미지의 시각적 분석 결과와 일치하지 않습니다.

다양한 세포 유형을 대상으로 형광 시약을 사용하거나 사용하지 않고 생사 판별 및 분화 분석을 수행했으며, 결과는 Incucyte^® 세포별 분석 또는 고급 무표지 형태학적 분석을 통해 검증했습니다. Incucyte^® 고급 무표지 분류 분석에서 생성된 무표지 데이터는 형광 시약을 사용한 분석과 비교했을 때 동등하고 재현 가능한 결과를 보여주었습니다.

윤곽선은 세포 분절을 나타내고 색상은 세포 유형(빨간색 = 사멸, 자홍색 = 살아있는 가지형 세포, 청록색 = 살아있는 아메바형 세포)을 나타냅니다. iPSC 유래 미세아교세포를 96웰 플레이트에 웰당 12,000개씩 접종했습니다. 세포는 미세아교세포 전용 배지에서 배양하고 정기적으로 배지를 교체했습니다. 배양은 Incucyte^® 시스템으로 모니터링하고 Incucyte^® AI 세포 건강 분석 도구를 사용하여 세포 생존율을 정량화했습니다. 생존 세포 집단의 특성 분석은 Advanced Label-free Classification을 사용하여 가지형(휴지) 형태와 아메바형(활성화) 형태의 세포 비율을 측정했습니다. 세포는 대부분 휴지 상태를 유지했지만, 배양 48시간 후 생존율이 급격히 감소했습니다.