미생물학적 오염 물질

생물학적 제제 또는 바이러스 백신의 생산 과정 전체에서 무균 시험을 수행하고 입증해야 한다.

싸토리우스는 GMP 규정 및 유럽약전(EP), 일본약전(JP), 미국약전(USP) 표준에 따라 직접 접종 및 멤브레인 여과를 통한 무균 시험을 제공합니다.

시험 전에 시료 매트릭스는 저해 효과를 검사하기 위해 분석에서 검증되어야 합니다. 이는 대표적인 시험 미생물을 낮은 농도로 첨가하고 허용 가능한 성장을 관찰함으로써 달성됩니다.

다음 미생물은 모델 미생물로 적합합니다:

호기성 박테리아

• 황색포도상구균
• 바실러스 서브틸리스
• 녹농균

혐기성 박테리아

• 클로스트리디움 스포로게네스

곰팡이

• 칸디다 알비칸스
• 아스페르길루스 브라질렌시스

직접 무균성 시험에서 샘플은 두 가지 다른 성장 배지(액체 티오글리콜레이트와 대두 카제인 소화 배지)에 접종됩니다. 멤브레인 여과 시험의 경우, 샘플은 0.45 µM 필터를 통해 여과되며, 이후 트립티케이스 대두 육즙(TSB)과 액체 티오글리콜레이트 배지에 접종됩니다. 두 방법 모두에서 시험은 14일 동안 배양됩니다. Sartorius는 최종 관찰 후 5일 이내에 분석 증명서와 함께 검정 결과를 보고할 수 있습니다.

무균성 시험이 무균으로 의도되지 않은 제품에는 적용할 수 없음을 유의해야 합니다. 이 경우 생물학적 오염도 시험을 사용해야 합니다.

Sartorius는 귀하의 재료에 대한 적절한 시험, 샘플 수 및 용량에 대해 조언할 수 있습니다.

전문가와 상담

생물학적 부하 시험의 목적은 호기성 조건에서 성장할 수 있는 중온성 박테리아와 곰팡이를 계수하는 것입니다. 이 시험은 주로 물질이나 제제가 미생물학적 품질에 대해 설정된 사양을 준수하는지 여부를 판단하기 위해 설계되었습니다. 무균 시험과 유사하지만, 추가 처리를 거칠 예정이므로 시료가 무균일 필요가 없는 경우에 수행됩니다. 따라서 이 시험은 일반적으로 원자재 및 공정 중 샘플(대량 수확물 등)에 사용되며, 고객이 내부 프로세스에 대해 허용 가능한 생물학적 부하 한계를 설정한 경우에 사용됩니다. (무균 시험은 무균으로 예상되는 대량 수확 샘플에 대해서도 수행될 수 있습니다. 생물학적 부하 또는 무균 시험 중 어떤 것을 사용할지는 개발자의 재량입니다.)

생물학적 부하 시험에는 평판 또는 멤브레인 여과 두 가지 방법을 사용할 수 있습니다. 두 방법 모두 규제 기관에서 허용되며 개발자의 재량에 따라 사용될 수 있습니다. 평판 방법은 대량의 샘플을 처리하는 데 더 일반적입니다. 항생제와 같은 특정 억제 효과가 관찰되면 멤브레인 여과법을 사용할 수 있습니다.

평판 계수 방법에서는 시험 물질을 완충수에 10배 희석한 후 미리 정의된 용량을 2개의 TSA 평판과 2개의 SDA 평판에 도말합니다. 이를 배양하고 평균 CFU/mL를 기록합니다.

Sartorius는 귀하의 물질에 대한 적절한 시험 및 시험 방법을 조언할 수 있습니다.

전문가와 상담

마이코플라스마 검출 및 제거는 임상 연구 및 인체 사용을 위해 허가된 생물학적 제제에 매우 중요합니다. 이 미생물군은 다양하고 까다로운 성장 요구 조건을 가지고 있어 검사가 복잡합니다. Sartorius는 현행 의약품 기술 요건 국제 조화 협의회(ICH), 유럽 약전(EP), 미국 약전(USP) 지침을 준수하는 cGMP 표준에 맞는 마이코플라스마 검사 서비스를 제공합니다.

유럽 약전(EP)에 설명된 마이코플라스마 검사의 전통적인 구성 요소는 한천 및 육즙 방법과 체외 지표 세포 배양 방법의 두 가지입니다. 검사할 시료 매트릭스는 검사 전에 분석에서 적격성을 입증해야 하며, 이는 저농도의 검사 생물체로 시험 재료를 접종하고 검출을 입증하는 것을 포함합니다.

다음 생물체들은 검사 생물체로 적합합니다:

• A. 레이들로이
• M. 갈리셉티쿰
• M. 발효균
• M. 돼지비염균
• M. 오랄레
• M. 폐렴균

한천 및 육수

한천 및 육수 방법의 경우, 시료를 다양한 액체 및 고체 배지에 접종한 후 서로 다른 환경 조건(호기성 및 혐기성)에서 배양합니다. 배양 기간 동안 접종된 육수의 시료를 채취하여 한천 배지에도 접종합니다. 집락 검출은 양성 반응을 나타내며, 전체 검사는 28일 동안 지속됩니다.

지표 세포 배양

지표 세포 배양 방법은 샘플을 적절한 세포 기질(마우스 3T3 또는 베로 세포)에 접종하고, DNA에 결합하는 형광 염료로 염색하여 배양해야 합니다. 배양된 세포는 광학 현미경으로 관찰하여 지표 세포 핵 주변의 형광 반점 또는 과립을 식별하며, 이는 마이코플라스마의 존재를 나타냅니다. Sartorius는 최종 관찰 후 5일 이내에 분석 인증서와 함께 검사 결과를 보고할 수 있습니다.

마이코플라스마 중합효소연쇄반응(PCR) 신속 검사

한천 및 육즙 배지 방법 외에도, 유럽약전은 적절한 검증 후 PCR 기반 마이코플라스마 검사를 이제 수용합니다. 유럽약전은 2012년부터 생물의약품 제품 출시를 위한 PCR 기반 마이코플라스마 검출을 수용한 미국 식품의약국(FDA)에 동참하고 있습니다. 이 검사를 통해 제조업체는 최대 28일이 걸릴 수 있는 기존 방법을 신속한 기술로 대체할 수 있습니다. 마이코플라스마 PCR 검사는 싸토리우스에서 수행할 수 있으며, 샘플 접수 후 48시간 내에 결과를 보고할 수 있습니다.

전문가와 상담

이 검사는 마이코플라스마 종에 취약한 인간 또는 영장류 세포주를 검사할 때 수행됩니다. 샘플은 두 가지 유형의 선택적 한천 배지와 한 가지 유형의 육즙 배지에 접종됩니다. 배지는 36~38°C에서 56일 동안 배양되며, 마이코박테리아의 존재 여부를 관찰합니다.

시험을 검증하기 위해, 마이코박테리아 성장 억제를 테스트하기 위해 양성 대조군과 함께 시험 물질을 도전시키는 스파이크 대조군이 포함됩니다.

이 방법은 유럽 약전 섹션 2.6.2를 준수합니다.

전문가와 상담

엔도톡신 검사는 일반적으로 최종 의약품에서만 수행됩니다. 엔도톡신은 그람 음성 박테리아의 세포벽 외막의 일부로, 생물의약품 생산 중 세포 배양을 오염시키거나 최종 치료 제품을 오염시킬 수 있습니다.

탁도 측정 검사는 대서양 철갑상어의 혈액 세포(아메보사이트)의 수성 추출물인 리물루스 아메보사이트 용해물(LAL)을 액체 시료 또는 표준 엔도톡신 희석액에 추가하여 수행됩니다. 그런 다음 반응 혼합물의 탁도를 측정합니다. 엔도톡신 농도가 높을수록 응고 효소가 더 빠르게 활성화되어 시료가 더 탁해집니다. 동역학적 분석으로, 각 시료가 특정 광학 밀도(OD)에 도달하는 시간이 중요한 측정 기준입니다.

Pyros^® Kinetix^® Flex 및 Pyros^® eXpress 소프트웨어는 탁도 동역학 분석을 수행하도록 검증되었습니다. 시료 개시 시간은 표준 곡선을 기준으로 참조되어 시료의 엔도톡신 농도를 정량화합니다.

싸토리우스에서 수행된 운동학적 엔도톡신 분석은 조화로운 USP <85> 박테리아 엔도톡신 및 EP 2.6.14 박테리아 엔도톡신을 따릅니다.

규정에 따라 새로운 샘플 매트릭스를 테스트하기 전에 억제 및 증강에 대한 샘플 매트릭스 자격 인증이 필요합니다.

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